Nature.com-এ আসার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজারটি ব্যবহার করছেন, সেটিতে CSS-এর সমর্থন সীমিত। সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য, আমরা আপনার ব্রাউজারের একটি নতুন সংস্করণ ব্যবহার করার (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে কম্প্যাটিবিলিটি মোড বন্ধ করার) পরামর্শ দিচ্ছি। আপাতত, নিরবচ্ছিন্ন সমর্থন নিশ্চিত করার জন্য, আমরা সাইটটি কোনো স্টাইলিং বা জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই প্রদর্শন করছি।
ইউনানে ঔষধি উদ্ভিদ প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর চাষের নিরাপত্তার জন্য ক্যাডমিয়াম (Cd) দূষণ একটি সম্ভাব্য হুমকি। বাহ্যিক Cd চাপের অধীনে, চুন প্রয়োগ (০, ৭৫০, ২২৫০ এবং ৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার) এবং অক্সালিক অ্যাসিড (০, ০.১ এবং ০.২ মোল/লিটার) দিয়ে পাতায় স্প্রে করার ফলে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর Cd সঞ্চয়ন এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, সিস্টেমিক ও ঔষধি উপাদানের উপর কী প্রভাব পড়ে, তা বোঝার জন্য মাঠ পর্যায়ে পরীক্ষা চালানো হয়েছিল। ফলাফলে দেখা গেছে যে, Cd চাপের অধীনে চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে পাতায় স্প্রে করার ফলে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর Ca2+ উপাদান বৃদ্ধি পায় এবং Cd2+-এর বিষাক্ততা হ্রাস পায়। চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিড যোগ করার ফলে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের কার্যকারিতা বৃদ্ধি পায় এবং অসমোটিক নিয়ন্ত্রকদের বিপাক পরিবর্তিত হয়। সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য হলো CAT-এর কার্যকারিতা ২.৭৭ গুণ বৃদ্ধি পাওয়া। অক্সালিক অ্যাসিডের প্রভাবে, SOD-এর কার্যকারিতা ১.৭৮ গুণ বৃদ্ধি পায়। এমডিএ (MDA)-এর পরিমাণ ৫৮.৩৮% হ্রাস পেয়েছে। দ্রবণীয় শর্করা, মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিড, প্রোলিন এবং দ্রবণীয় প্রোটিনের সাথে এর একটি অত্যন্ত তাৎপর্যপূর্ণ সম্পর্ক রয়েছে। চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিড প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর ক্যালসিয়াম আয়ন (Ca2+)-এর পরিমাণ বাড়াতে, ক্যাডমিয়াম (Cd)-এর পরিমাণ কমাতে, এর প্রতিকূলতা সহনশীলতা উন্নত করতে এবং মোট স্যাপোনিন ও ফ্ল্যাভোনয়েডের উৎপাদন বাড়াতে পারে। ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ সর্বনিম্ন, যা কন্ট্রোলের চেয়ে ৬৮.৫৭% কম এবং এটি আদর্শ মানের (Cd≤০.৫ মিলিগ্রাম কেজি-১, জিবি/টি ১৯০৮৬-২০০৮) সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। এসপিএন (SPN)-এর অনুপাত ছিল ৭.৭৩%, যা সমস্ত ট্রিটমেন্টের মধ্যে সর্বোচ্চ পর্যায়ে পৌঁছেছে এবং ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ ২১.৭৪% উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়ে আদর্শ ঔষধি মান এবং সর্বোত্তম ফলনে পৌঁছেছে।
ক্যাডমিয়াম (Cd) চাষের মাটির একটি সাধারণ দূষক, যা সহজেই স্থানান্তরিত হয় এবং এর উল্লেখযোগ্য জৈবিক বিষাক্ততা রয়েছে। এল-শাফেই এবং অন্যান্যরা² রিপোর্ট করেছেন যে ক্যাডমিয়ামের বিষাক্ততা ব্যবহৃত উদ্ভিদের গুণমান এবং উৎপাদনশীলতাকে প্রভাবিত করে। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে দক্ষিণ-পশ্চিম চীনের চাষের মাটিতে ক্যাডমিয়ামের অত্যধিক মাত্রা গুরুতর হয়ে উঠেছে। ইউনান প্রদেশ চীনের জীববৈচিত্র্যের রাজ্য, যেখানে ঔষধি উদ্ভিদের প্রজাতি দেশে প্রথম স্থানে রয়েছে। তবে, ইউনান প্রদেশ খনিজ সম্পদে সমৃদ্ধ, এবং খনন প্রক্রিয়া অনিবার্যভাবে মাটিতে ভারী ধাতুর দূষণ ঘটায়, যা স্থানীয় ঔষধি উদ্ভিদের উৎপাদনকে প্রভাবিত করে।
প্যানাক্স নটোগিনসেং (বার্কিল) চেন৩) হলো অ্যারালিয়াসি পরিবারের প্যানাক্স গণের অন্তর্গত একটি অত্যন্ত মূল্যবান বহুবর্ষজীবী ভেষজ ঔষধি উদ্ভিদ। প্যানাক্স নটোগিনসেং রক্ত ​​সঞ্চালন উন্নত করে, রক্ত ​​জমাট বাঁধা দূর করে এবং ব্যথা উপশম করে। এর প্রধান উৎপাদন এলাকা হলো ইউনান প্রদেশের ওয়েনশান প্রিফেকচার৫। স্থানীয় প্যানাক্স নটোগিনসেং চাষের এলাকাগুলোর ৭৫%-এরও বেশি মাটি ক্যাডমিয়াম দ্বারা দূষিত, যার মাত্রা বিভিন্ন এলাকায় ৮১% থেকে ১০০%-এরও বেশি পর্যন্ত পরিবর্তিত হয়৬। ক্যাডমিয়ামের বিষাক্ত প্রভাব প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর ঔষধি উপাদান, বিশেষ করে স্যাপোনিন এবং ফ্ল্যাভোনয়েডের উৎপাদনও উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে। স্যাপোনিন হলো এক প্রকার গ্লাইকোসিডিক যৌগ যার অ্যাগ্লাইকোন হলো ট্রাইটারপেনয়েড বা স্পাইরোস্টেন। এগুলো অনেক ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের প্রধান সক্রিয় উপাদান এবং এতে স্যাপোনিন থাকে। কিছু স্যাপোনিনের ব্যাকটেরিয়ারোধী কার্যকলাপ বা জ্বরনাশক, প্রশান্তিদায়ক এবং ক্যান্সাররোধী প্রভাবের মতো মূল্যবান জৈবিক কার্যকলাপও রয়েছে৭। ফ্ল্যাভোনয়েড বলতে সাধারণত এমন একগুচ্ছ যৌগকে বোঝায়, যেখানে ফেনোলিক হাইড্রোক্সিল গ্রুপসহ দুটি বেনজিন বলয় তিনটি কেন্দ্রীয় কার্বন পরমাণুর মাধ্যমে সংযুক্ত থাকে। এর মূল কেন্দ্র হলো ২-ফিনাইলক্রোমানোন ৮। এটি একটি শক্তিশালী অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট যা উদ্ভিদে থাকা অক্সিজেন ফ্রি র‍্যাডিকেলগুলোকে কার্যকরভাবে দূর করতে পারে। এটি প্রদাহ সৃষ্টিকারী জৈবিক এনজাইমের অনুপ্রবেশকেও বাধা দিতে পারে, ক্ষত নিরাময় ও ব্যথা উপশমে সহায়তা করতে পারে এবং কোলেস্টেরলের মাত্রা কমাতে পারে। এটি প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর অন্যতম প্রধান সক্রিয় উপাদান। প্যানাক্স জিনসেং উৎপাদনকারী এলাকাগুলোর মাটিতে ক্যাডমিয়াম দূষণের সমস্যা মোকাবিলা করা এবং এর অপরিহার্য ঔষধি উপাদানগুলোর উৎপাদন নিশ্চিত করার জরুরি প্রয়োজন রয়েছে।
ক্যাডমিয়াম দূষণ থেকে মাটির স্থায়ী বিশুদ্ধকরণের জন্য চুন বহুল ব্যবহৃত একটি নিষ্ক্রিয়কারী পদার্থ¹⁰। এটি মাটির pH মান বৃদ্ধি করে এবং মাটির ক্যাটায়ন বিনিময় ক্ষমতা (CEC), মাটির লবণ সম্পৃক্ততা (BS) ও মাটির জারণ-বিজারণ বিভব (Eh) পরিবর্তন করে মাটিতে Cd-এর জৈব প্রাপ্যতা হ্রাস করার মাধ্যমে মাটিতে Cd-এর শোষণ ও জমা হওয়াকে প্রভাবিত করে³,¹¹। এছাড়াও, চুন প্রচুর পরিমাণে Ca²⁺ সরবরাহ করে, Cd²⁺-এর সাথে আয়নিক বৈরিতা তৈরি করে, শিকড়ের শোষণ স্থানের জন্য প্রতিযোগিতা করে, মাটিতে Cd-এর পরিবহন প্রতিরোধ করে এবং এর জৈবিক বিষাক্ততা কম। যখন Cd চাপের অধীনে ৫০ mmol L⁻¹ Ca যোগ করা হয়েছিল, তখন তিলের পাতায় Cd পরিবহন বাধাগ্রস্ত হয়েছিল এবং Cd-এর সঞ্চয় ৮০% হ্রাস পেয়েছিল। ধান (Oryza sativa L.) এবং অন্যান্য ফসলে বেশ কিছু অনুরূপ গবেষণা প্রকাশিত হয়েছে¹²,¹³।
ফসলের পাতায় স্প্রে করে ভারী ধাতুর সঞ্চয় নিয়ন্ত্রণ করা সাম্প্রতিক বছরগুলিতে ভারী ধাতু নিয়ন্ত্রণের একটি নতুন পদ্ধতি। এর মূলনীতি উদ্ভিদ কোষের চিলেশন প্রতিক্রিয়ার সাথে সম্পর্কিত, যার ফলে কোষ প্রাচীরে ভারী ধাতু জমা হয় এবং উদ্ভিদ দ্বারা ভারী ধাতুর শোষণ বাধাগ্রস্ত হয়¹⁴,¹⁵। একটি স্থিতিশীল ডাইঅ্যাসিড চিলেটিং এজেন্ট হিসাবে, অক্সালিক অ্যাসিড উদ্ভিদে সরাসরি ভারী ধাতব আয়নকে চিলেট করতে পারে, যার ফলে বিষাক্ততা হ্রাস পায়। গবেষণায় দেখা গেছে যে সয়াবিনে থাকা অক্সালিক অ্যাসিড Cd²⁺ কে চিলেট করতে পারে এবং উপরের ট্রাইকোম কোষের মাধ্যমে Cd-যুক্ত স্ফটিক মুক্ত করে, যা উদ্ভিদে Cd²⁺ এর মাত্রা কমিয়ে দেয়¹⁶। অক্সালিক অ্যাসিড মাটির pH নিয়ন্ত্রণ করতে পারে, সুপারঅক্সাইড ডিসমিউটেজ (SOD), পারঅক্সিডেজ (POD) এবং ক্যাটারেজ (CAT) এর কার্যকলাপ বাড়াতে পারে এবং দ্রবণীয় চিনি, দ্রবণীয় প্রোটিন, মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিড এবং প্রোলিনের বিপাকীয় নিয়ন্ত্রক হিসাবে কাজ করে¹⁷,¹⁸। উদ্ভিদে অ্যাসিড এবং অতিরিক্ত Ca2+ নিউক্লিয়েটিং প্রোটিনের ক্রিয়ায় ক্যালসিয়াম অক্সালেট অধঃক্ষেপ তৈরি করে। উদ্ভিদে Ca2+ এর ঘনত্ব নিয়ন্ত্রণ করে দ্রবীভূত অক্সালিক অ্যাসিড এবং Ca2+ এর নিয়ন্ত্রণ কার্যকরভাবে অর্জন করা যায় এবং অক্সালিক অ্যাসিড এবং Ca2+ এর অতিরিক্ত জমা এড়ানো যায়19,20।
প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ মাটির মেরামত প্রভাবকে প্রভাবিত করার অন্যতম প্রধান কারণ। দেখা গেছে যে চুনের মাত্রা ৭৫০ থেকে ৬০০০ কেজি/মি² পর্যন্ত হয়ে থাকে। ৫.০~৫.৫ পিএইচ-এর অম্লীয় মাটির ক্ষেত্রে, ৩০০০~৬০০০ কেজি/ঘণ্টা/মি² মাত্রায় চুন প্রয়োগের প্রভাব ৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/মি² মাত্রার চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি²¹। তবে, চুনের অতিরিক্ত প্রয়োগের ফলে মাটিতে কিছু নেতিবাচক প্রভাব দেখা দেয়, যেমন মাটির পিএইচ-এর উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন এবং মাটির সংকোচন²²। তাই, আমরা CaO প্রয়োগের মাত্রা ০, ৭৫০, ২২৫০ এবং ৩৭৫০ কেজি/হেক্টর/মি² হিসেবে নির্ধারণ করেছি। যখন অ্যারাবিডোপসিস থ্যালিয়ানা-তে অক্সালিক অ্যাসিড প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন দেখা গেছে যে ১০ মিলিমোল/লিটার ঘনত্বে Ca²⁺ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে এবং CRT জিন পরিবার, যা Ca²⁺ সংকেতকে প্রভাবিত করে, তীব্রভাবে সাড়া দিয়েছে²⁰। পূর্ববর্তী কিছু গবেষণার সমন্বয় আমাদের এই পরীক্ষার ঘনত্ব নির্ধারণ করতে এবং Ca2+ এবং Cd2+23,24,25-এর উপর বাহ্যিক সম্পূরকের মিথস্ক্রিয়ার প্রভাব আরও অধ্যয়ন করতে সাহায্য করেছে। অতএব, এই গবেষণার লক্ষ্য হলো ক্যাডমিয়াম-দূষিত মাটিতে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর ক্যাডমিয়াম উপাদান এবং চাপ সহনশীলতার উপর বাহ্যিক চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিড পাতা স্প্রে-এর নিয়ন্ত্রণমূলক প্রক্রিয়া অন্বেষণ করা এবং প্যানাক্স নটোগিনসেং উৎপাদনের ঔষধি গুণমান ও কার্যকারিতা আরও ভালোভাবে নিশ্চিত করার উপায় খুঁজে বের করা। এটি ক্যাডমিয়াম-দূষিত মাটিতে তৃণজাতীয় উদ্ভিদের চাষের পরিধি বাড়াতে এবং ঔষধ বাজারের জন্য প্রয়োজনীয় উচ্চ-মানের, টেকসই উৎপাদন অর্জনের বিষয়ে মূল্যবান নির্দেশনা প্রদান করে।
স্থানীয় জিনসেং জাত ওয়েনশান প্যানাক্স নটোগিনসেং-কে উপকরণ হিসেবে ব্যবহার করে, ইউনান প্রদেশের ওয়েনশান প্রিফেকচারের কিউবেই কাউন্টির লান্নিঝাই-এ (২৪°১১′ উত্তর, ১০৪°৩′ পূর্ব, উচ্চতা ১৪৪৬ মি.) একটি মাঠ পর্যায়ের পরীক্ষা চালানো হয়েছিল। এখানকার গড় বার্ষিক তাপমাত্রা ১৭° সেলসিয়াস এবং গড় বার্ষিক বৃষ্টিপাত ১২৫০ মিমি। পরীক্ষিত মাটির পটভূমি মানগুলো ছিল: মোট নাইট্রোজেন (TN) ০.৫৭ গ্রাম কেজি⁻¹, মোট ফসফরাস (TP) ১.৬৪ গ্রাম কেজি⁻¹, মোট কার্বন (TC) ১৬.৩১ গ্রাম কেজি⁻¹, জৈব পদার্থ (OM) ৩১.৮৬ গ্রাম কেজি⁻¹, ক্ষারীয় হাইড্রোলাইজড নাইট্রোজেন (N) ৮৮.৮২ মিলিগ্রাম কেজি⁻¹, মুক্ত ফসফরাস ১৮.৫৫ মিলিগ্রাম কেজি⁻¹, মুক্ত পটাশিয়াম ১০০.৩৭ মিলিগ্রাম কেজি⁻¹, মোট ক্যাডমিয়াম ০.৩ মিলিগ্রাম কেজি⁻¹, এবং pH ৫.৪।
২০১৭ সালের ১০ই ডিসেম্বর, ৬ মিগ্রা/কেজি Cd2+ (CdCl2·2.5H2O) এবং চুন (০, ৭৫০, ২২৫০ এবং ৩৭৫০ কেজি/হেক্টর/বর্গমিটার) মিশ্রিত করে প্রতিটি প্লটের মাটির উপরিভাগে ০~১০ সেমি পুরু একটি স্তরে প্রয়োগ করা হয়েছিল। প্রতিটি প্রয়োগ ৩ বার পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল। পরীক্ষামূলক প্লটগুলো এলোমেলোভাবে স্থাপন করা হয়েছিল, প্রতিটি প্লটের আয়তন ছিল ৩ বর্গমিটার। চাষের ১৫ দিন পর এক বছর বয়সী প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর চারা রোপণ করা হয়েছিল। সানশেড নেট ব্যবহার করার সময়, সানশেড নেটের ভিতরে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর আলোর তীব্রতা স্বাভাবিক প্রাকৃতিক আলোর তীব্রতার প্রায় ১৮% ছিল। স্থানীয় ঐতিহ্যবাহী চাষ পদ্ধতি অনুসারে চাষাবাদ করা হয়েছিল। ২০১৯ সালে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর পাকার পর্যায়ের আগে সোডিয়াম অক্সালেট আকারে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা হয়েছিল। অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব ছিল যথাক্রমে ০, ০.১ এবং ০.২ মোল/লিটার, এবং লিটার লিচ দ্রবণের গড় pH অনুকরণ করার জন্য NaOH ব্যবহার করে pH ৫.১৬-তে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। সপ্তাহে একবার সকাল ৮:০০ টায় পাতার উপরের এবং নিচের পৃষ্ঠে স্প্রে করুন। পঞ্চম সপ্তাহে ৪ বার স্প্রে করার পর, ৩ বছর বয়সী প্যানাক্স নটোগিনসেং গাছ সংগ্রহ করা হয়েছিল।
২০১৯ সালের নভেম্বরে, মাঠ থেকে তিন বছর বয়সী প্যানাক্স নটোগিনসেং গাছ সংগ্রহ করে সেগুলিতে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা হয়েছিল। শারীরবৃত্তীয় বিপাক এবং এনজাইমের কার্যকলাপ পরিমাপের জন্য প্রয়োজনীয় তিন বছর বয়সী প্যানাক্স নটোগিনসেং গাছের কিছু নমুনা হিমায়িত করার জন্য টিউবে রাখা হয়েছিল। তরল নাইট্রোজেন দিয়ে দ্রুত হিমায়িত করে তারপর -৮০°C তাপমাত্রার একটি রেফ্রিজারেটরে স্থানান্তর করা হয়েছিল। পরিপক্ক অবস্থায় ক্যাডমিয়াম (Cd) এবং সক্রিয় উপাদানের পরিমাণ পরিমাপের জন্য কিছু মূলের নমুনা কলের জল দিয়ে ধুয়ে, ১০৫°C তাপমাত্রায় ৩০ মিনিট ধরে শুকানো হয়েছিল, ৭৫°C তাপমাত্রায় স্থির ওজনে আনা হয়েছিল এবং সংরক্ষণের জন্য হামানদিস্তায় গুঁড়ো করা হয়েছিল।
০.২ গ্রাম শুকনো উদ্ভিদের নমুনা ওজন করে একটি আর্লেনমেয়ার ফ্লাস্কে রাখুন, এর সাথে ৮ মিলি HNO3 এবং ২ মিলি HClO4 যোগ করে সারারাত ঢেকে রাখুন। পরের দিন, আর্লেনমেয়ার ফ্লাস্কের মধ্যে একটি বাঁকানো ফানেল রেখে ইলেকট্রোথার্মাল ডাইজেশন শুরু করুন, যতক্ষণ না সাদা ধোঁয়া বের হয় এবং পাচক রস স্বচ্ছ হয়ে আসে। ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা করার পর, মিশ্রণটি একটি ১০ মিলি ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করা হয়। একটি অ্যাটমিক অ্যাবজর্পশন স্পেকট্রোমিটার (Thermo ICE™ 3300 AAS, USA) ব্যবহার করে ক্যাডমিয়ামের (Cd) পরিমাণ নির্ণয় করা হয়। (GB/T 23739-2009)।
০.২ গ্রাম শুকনো উদ্ভিদের নমুনা ওজন করে একটি ৫০ মিলি প্লাস্টিকের বোতলে রাখুন, ১০ মিলি দ্রবণে ১ মোল/লিটার HCl যোগ করুন, বোতলের মুখ বন্ধ করে ১৫ ঘন্টা ধরে ভালোভাবে ঝাঁকান এবং ছেঁকে নিন। একটি পিপেট ব্যবহার করে প্রয়োজনীয় পরিমাণ পরিস্রুত দ্রবণ তুলে নিন, সেই অনুযায়ী এটিকে লঘু করুন এবং SrCl2 দ্রবণ যোগ করে Sr2+ এর ঘনত্ব ১ গ্রাম/লিটারে নিয়ে আসুন। ক্যালসিয়ামের (Ca) পরিমাণ একটি অ্যাটমিক অ্যাবজর্পশন স্পেকট্রোমিটার (Thermo ICE™ 3300 AAS, USA) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।
ম্যালনডাইঅ্যালডিহাইড (MDA), সুপারঅক্সাইড ডিসমিউটেজ (SOD), পারঅক্সিডেজ (POD) এবং ক্যাটারেজ (CAT) পরিমাপের জন্য রেফারেন্স কিট পদ্ধতি (DNM-9602, বেইজিং প্রং নিউ টেকনোলজি কোং, লিমিটেড, পণ্য নিবন্ধন নং: বেইজিং ফার্মাকোপিয়া (সঠিক) ২০১৩ নং ২৪০০১৪৭) ব্যবহার করুন।
প্রায় ০.০৫ গ্রাম প্যানাক্স নটোগিনসেং নমুনা ওজন করে নিন এবং টিউবের গা বরাবর অ্যানথ্রোন-সালফিউরিক অ্যাসিড বিকারক যোগ করুন। তরলটি ভালোভাবে মেশানোর জন্য টিউবটি ২-৩ সেকেন্ড ঝাঁকান। রঙ তৈরি হওয়ার জন্য টিউবটি একটি টিউব র‍্যাকে ১৫ মিনিটের জন্য রাখুন। দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ ৬২০ ন্যানোমিটার তরঙ্গদৈর্ঘ্যে আল্ট্রাভায়োলেট-ভিসিবল স্পেকট্রোফটোমেট্রি (UV-5800, সাংহাই ইউয়ানশি ইন্সট্রুমেন্ট কোং, লিমিটেড, চীন) দ্বারা নির্ণয় করা হয়েছিল।
০.৫ গ্রাম তাজা প্যানাক্স নটোগিনসেং নমুনা ওজন করে, ৫ মিলি পাতিত জলের সাথে পিষে একটি সমজাতীয় মিশ্রণ তৈরি করা হয় এবং তারপর ১০ মিনিটের জন্য ১০,০০০ g-তে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়। উপরিভাগের তরলকে একটি নির্দিষ্ট আয়তনে লঘু করা হয়েছিল। কুমাশি ব্রিলিয়ান্ট ব্লু পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ ৫৯৫ nm তরঙ্গদৈর্ঘ্যে আল্ট্রাভায়োলেট-ভিজিবল স্পেকট্রোফটোমেট্রি (UV-5800, সাংহাই ইউয়ানশি ইন্সট্রুমেন্ট কোং, লিমিটেড, চীন) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিনের স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়েছিল।
০.৫ গ্রাম তাজা নমুনা ওজন করে, ৫ মিলি ১০% অ্যাসিটিক অ্যাসিড যোগ করে পিষে একটি সমসত্ত্ব মিশ্রণ তৈরি করুন, তারপর ছেঁকে নিয়ে একটি নির্দিষ্ট আয়তন পর্যন্ত লঘু করুন। নিনহাইড্রিন দ্রবণ ব্যবহার করে রঙ তৈরির পদ্ধতি প্রয়োগ করা হয়েছিল। মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ ইউভি-দৃশ্যমান স্পেকট্রোফটোমেট্রি (UV-5800, সাংহাই ইউয়ানশি ইন্সট্রুমেন্ট কোং, লিমিটেড, চীন) দ্বারা ৫৭০ ন্যানোমিটারে নির্ণয় করা হয়েছিল এবং লিউসিন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ২৮-এর উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়েছিল।
০.৫ গ্রাম তাজা নমুনা ওজন করে, তাতে ৫ মিলি ৩% সালফোসালিসাইলিক অ্যাসিড দ্রবণ যোগ করা হয়, এরপর ওয়াটার বাথে রেখে ১০ মিনিট ধরে গরম ও ঝাঁকানো হয়। ঠান্ডা হওয়ার পর, দ্রবণটি ছেঁকে একটি স্থির আয়তনে আনা হয়। অ্যাসিড নিনহাইড্রিন ব্যবহার করে কালারমেট্রিক পদ্ধতি প্রয়োগ করা হয়েছিল। প্রোলিনের পরিমাণ আল্ট্রাভায়োলেট-ভিসিবল স্পেকট্রোফোটোমেট্রি (UV-5800, সাংহাই ইউয়ানশি ইন্সট্রুমেন্ট কোং, লিমিটেড, চীন) দ্বারা ৫২০ ন্যানোমিটার তরঙ্গদৈর্ঘ্যে নির্ণয় করা হয় এবং প্রোলিন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ২৯-এর উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়।
গণপ্রজাতন্ত্রী চীনের ফার্মাকোপিয়ার (২০১৫ সংস্করণ) রেফারেন্স অনুযায়ী হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি ব্যবহার করে স্যাপোনিনের পরিমাণ নির্ণয় করা হয়েছিল। হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির মূল নীতি হলো, মোবাইল ফেজ হিসেবে উচ্চ-চাপের তরল ব্যবহার করা এবং স্টেশনারি ফেজে হাই-পারফরম্যান্স কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির অতিসূক্ষ্ম কণা পৃথকীকরণ প্রযুক্তি প্রয়োগ করা। এর কার্যপ্রণালী নিম্নরূপ:
HPLC শর্তাবলী এবং সিস্টেম উপযুক্ততা পরীক্ষা (সারণি ১): ফিলার হিসেবে অক্টাডেসিলসিলেন আবদ্ধ সিলিকা জেল, মোবাইল ফেজ A হিসেবে অ্যাসিটোনাইট্রাইল এবং মোবাইল ফেজ B হিসেবে পানি ব্যবহার করুন। নিচের সারণিতে দেখানো অনুযায়ী গ্রেডিয়েন্ট এলুশন সম্পাদন করুন। ডিটেকশন ওয়েভলেংথ হলো ২০৩ nm। Panax notoginseng-এর মোট স্যাপোনিনের R1 পিক অনুসারে, থিওরিটিক্যাল প্লেটের সংখ্যা কমপক্ষে ৪০০০ হওয়া উচিত।
প্রমাণ দ্রবণ প্রস্তুতকরণ: জিনসেনোসাইড Rg1, জিনসেনোসাইড Rb1 এবং নোটোজিনসেনোসাইড R1 সঠিকভাবে ওজন করুন এবং মিথানল যোগ করে এমন একটি মিশ্রণ প্রস্তুত করুন যাতে প্রতি ১ মিলি দ্রবণে ০.৪ মিলিগ্রাম জিনসেনোসাইড Rg1, ০.৪ মিলিগ্রাম জিনসেনোসাইড Rb1 এবং ০.১ মিলিগ্রাম নোটোজিনসেনোসাইড R1 থাকে।
পরীক্ষার দ্রবণ প্রস্তুতকরণ: ০.৬ গ্রাম প্যানাক্স জিনসেং গুঁড়া ওজন করে তাতে ৫০ মিলি মিথানল যোগ করুন। মিশ্র দ্রবণটি ওজন করে (W1) সারারাত রেখে দেওয়া হয়। এরপর মিশ্র দ্রবণটিকে একটি ওয়াটার বাথে ৮০° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ২ ঘণ্টা ধরে মৃদু আঁচে ফোটানো হয়। ঠান্ডা হওয়ার পর, মিশ্র দ্রবণটি ওজন করুন এবং প্রথম ভর W1-এর সাথে প্রস্তুতকৃত মিথানল যোগ করুন। তারপর ভালোভাবে ঝাঁকিয়ে ছেঁকে নিন। ছাঁকা দ্রবণটি বিশ্লেষণের জন্য রেখে দেওয়া হয়।
স্যাপোনিন ২৪-এর পরিমাণ নির্ণয় করার জন্য, নির্ভুলভাবে ১০ μL স্ট্যান্ডার্ড সলিউশন এবং ১০ μL ফিলট্রেট সংগ্রহ করে একটি হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফে (Thermo HPLC-ultimate 3000, Seymour Fisher Technology Co., Ltd.) ইনজেক্ট করুন।
স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ: Rg1, Rb1 এবং R1-এর একটি মিশ্র স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণের পরিমাপ। ক্রোমাটোগ্রাফির শর্তাবলী পূর্বের মতোই। y-অক্ষে পরিমাপকৃত পিক এরিয়া এবং x-অক্ষে স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণে স্যাপোনিনের ঘনত্ব স্থাপন করে স্ট্যান্ডার্ড কার্ভটি গণনা করুন। স্ট্যান্ডার্ড কার্ভে নমুনার পরিমাপকৃত পিক এরিয়া প্রতিস্থাপন করে স্যাপোনিনের ঘনত্ব গণনা করা যেতে পারে।
০.১ গ্রাম পি. নটোজেনসিংস নমুনা ওজন করে তাতে ৫০ মিলি ৭০% CH3OH দ্রবণ যোগ করা হলো। ২ ঘন্টা ধরে আলট্রাসনিক নিষ্কাশন করা হয়, এরপর ৪০০০ আরপিএম গতিতে ১০ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়। ১ মিলি সুপারন্যাট্যান্ট নিয়ে তা ১২ গুণ লঘু করা হলো। ২৪৯ ন্যানোমিটার তরঙ্গদৈর্ঘ্যে আলট্রাভায়োলেট-ভিজিবল স্পেকট্রোফোটোমেট্রি (UV-5800, সাংহাই ইউয়ানশি ইন্সট্রুমেন্ট কোং, লিমিটেড, চীন) ব্যবহার করে ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ নির্ণয় করা হয়। কোয়ারসেটিন হলো অন্যতম একটি আদর্শ সাধারণ পদার্থ8।
এক্সেল ২০১০ সফটওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা সাজানো হয়েছিল। ডেটার ভেদাঙ্ক বিশ্লেষণ করার জন্য এসপিএসএস ২০ পরিসংখ্যান সফটওয়্যার ব্যবহার করা হয়েছিল। অরিজিন প্রো ৯.১ ব্যবহার করে ছবিগুলো আঁকা হয়েছিল। গণনাকৃত পরিসংখ্যানগত মানগুলোর মধ্যে রয়েছে গড় ± এসডি। পরিসংখ্যানগত তাৎপর্যের বিবৃতি পি < ০.০৫ এর উপর ভিত্তি করে দেওয়া হয়েছে।
পাতায় একই ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ক্ষেত্রে, প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ বাড়ার সাথে সাথে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে ক্যালসিয়ামের (Ca) পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (সারণি ২)। চুন প্রয়োগ না করার তুলনায়, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করে ৩৭৫০ কেজি/হেক্টর/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করলে ক্যালসিয়ামের পরিমাণ ২১২% বৃদ্ধি পায়। একই পরিমাণ চুন প্রয়োগের ক্ষেত্রে, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রের ঘনত্ব বাড়ার সাথে সাথে ক্যালসিয়ামের পরিমাণ সামান্য বৃদ্ধি পেয়েছে।
শিকড়ে ক্যাডমিয়ামের (Cd) পরিমাণ ০.২২ থেকে ০.৭০ মিলিগ্রাম/কেজি পর্যন্ত থাকে। অক্সালিক অ্যাসিডের একই স্প্রে ঘনত্বে, প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ বাড়ার সাথে সাথে ২২৫০ কেজি/হেক্টর ঘনত্বের ক্ষেত্রে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়। নিয়ন্ত্রিত নমুনার তুলনায়, ২২৫০ কেজি/হেক্টর চুন এবং ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পর শিকড়ে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ ৬৮.৫৭% হ্রাস পেয়েছে। যখন চুনবিহীন এবং ৭৫০ কেজি/হেক্টর চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর শিকড়ে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছিল। যখন ২২৫০ কেজি/বর্গমিটার চুন এবং ৩৭৫০ কেজি/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে শিকড়ে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ প্রথমে হ্রাস পায় এবং তারপর বৃদ্ধি পায়। এছাড়াও, দ্বিমুখী বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে চুন প্যানাক্স নটোগিনসেং মূলের ক্যালসিয়াম (Ca) উপাদানের উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে (F = 82.84**), চুন প্যানাক্স নটোগিনসেং মূলের ক্যাডমিয়াম (Cd) উপাদানের উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে (F = 74.99**), এবং অক্সালিক অ্যাসিডের উপরও উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে (F=7.72*)।
যোগ করা চুনের পরিমাণ এবং স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব বাড়ার সাথে সাথে MDA-এর পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। চুন যোগ না করে এবং ৩৭৫০ কেজি/মি² চুন যোগ করার পর প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে MDA-এর পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। ৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/মি² এবং ২২৫০ কেজি/ঘণ্টা/মি² প্রয়োগের হারে, ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ফলে চুনের পরিমাণ, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করার তুলনায়, যথাক্রমে ৫৮.৩৮% এবং ৪০.২১% হ্রাস পেয়েছে। সর্বনিম্ন MDA-এর পরিমাণ (৭.৫৭ ন্যানোমোল/গ্রাম) পরিলক্ষিত হয়েছে যখন ৭৫০ কেজি/হেক্টর/মি² চুন এবং ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা হয়েছে (চিত্র ১)।
ক্যাডমিয়াম স্ট্রেসের অধীনে প্যানাক্স নটোগিনসেং মূলে অক্সালিক অ্যাসিড পত্রীয় স্প্রে করার ফলে ম্যালনডাইঅ্যালডিহাইডের পরিমাণের উপর প্রভাব। দ্রষ্টব্য: চিত্রের লেজেন্ডে স্প্রে করার সময় অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব (মোল লিটার-১) নির্দেশ করা হয়েছে, বিভিন্ন ছোট হাতের অক্ষর একই চুন প্রয়োগের ট্রিটমেন্টগুলোর মধ্যে তাৎপর্যপূর্ণ পার্থক্য নির্দেশ করে। সংখ্যা (পি < ০.০৫)। নিচেও একই।
৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা চুন প্রয়োগ ছাড়া, প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে SOD সক্রিয়তায় কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখা যায়নি। যখন ০, ৭৫০ এবং ২২৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার চুন যোগ করা হয়, তখন ০.২ মোল/লিটার ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করে শোধন করা হলে SOD সক্রিয়তা অক্সালিক অ্যাসিড ব্যবহার না করার তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, যা যথাক্রমে ১৭৭.৮৯%, ৬১.৬২% এবং ৪৫.০৮% বৃদ্ধি পায়। চুন প্রয়োগ না করা হলে এবং ০.২ মোল/লিটার ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করে শোধন করা হলে মূলে SOD সক্রিয়তা (৫৯৮.১৮ ইউনিট/গ্রাম) সর্বোচ্চ ছিল। যখন একই ঘনত্বে বা ০.১ মোল/লিটার ঘনত্বে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা হয়, তখন যোগ করা চুনের পরিমাণ বাড়ার সাথে সাথে SOD সক্রিয়তাও বৃদ্ধি পায়। ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পর, SOD সক্রিয়তা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায় (চিত্র ২)।
ক্যাডমিয়াম চাপের অধীনে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে সুপারঅক্সাইড ডিসমিউটেজ, পারঅক্সিডেজ এবং ক্যাটালেজ এনজাইমের কার্যকলাপের উপর অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে পাতা স্প্রে করার প্রভাব
মূলে SOD সক্রিয়তার মতোই, চুন ছাড়া শোধন করা এবং ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা মূলে POD সক্রিয়তা ছিল সর্বোচ্চ (৬৩.৩৩ মাইক্রোমোল/গ্রাম), যা কন্ট্রোলের (২৫.৫০ মাইক্রোমোল/গ্রাম) চেয়ে ১৪৮.৩৫% বেশি। অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে-র ঘনত্ব বৃদ্ধি এবং ৩৭৫০ কেজি/বর্গমিটার চুন প্রয়োগের ফলে POD সক্রিয়তা প্রথমে বৃদ্ধি পায় এবং পরে হ্রাস পায়। ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড প্রয়োগের তুলনায়, ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড প্রয়োগে POD সক্রিয়তা ৩৬.৩১% হ্রাস পেয়েছে (চিত্র ২)।
০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা এবং ২২৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার বা ৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করা ছাড়া, CAT-এর সক্রিয়তা কন্ট্রোলের চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। যখন ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা হয় এবং ০.২২৫০ কেজি/বর্গমিটার বা ৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করা হয়, তখন অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করা ট্রিটমেন্টের তুলনায় CAT-এর সক্রিয়তা যথাক্রমে ২৭৬.০৮%, ২৭৬.৬৯% এবং ৩৩.০৫% বৃদ্ধি পায়। শিকড়ে CAT-এর সক্রিয়তা চুনবিহীন ট্রিটমেন্টে এবং ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড ট্রিটমেন্টে সর্বোচ্চ (৮০৩.৫২ মাইক্রোমোল/গ্রাম) ছিল। ৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার চুন এবং ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে ট্রিটমেন্ট করার সময় CAT-এর সক্রিয়তা সর্বনিম্ন (১৭২.৮৮ মাইক্রোমোল/গ্রাম) ছিল (চিত্র ২)।
দ্বিচলকীয় বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে, প্যানাক্স নটোগিনসেং মূলের CAT সক্রিয়তা এবং MDA সক্রিয়তা স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিড বা চুনের পরিমাণ এবং দুটি ট্রিটমেন্টের সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে সম্পর্কিত ছিল (সারণি ৩)। মূলের SOD সক্রিয়তা চুন ও অক্সালিক অ্যাসিড ট্রিটমেন্ট অথবা অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে-এর ঘনত্বের সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে সম্পর্কিত ছিল। মূলের POD সক্রিয়তা প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ অথবা চুন ও অক্সালিক অ্যাসিড ট্রিটমেন্টের উপর উল্লেখযোগ্যভাবে নির্ভরশীল ছিল।
চুন প্রয়োগের পরিমাণ এবং অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে-এর ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে শিকড়ে দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ হ্রাস পেয়েছে। চুন প্রয়োগ ছাড়া এবং যখন ৭৫০ কেজি/হেক্টর/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর শিকড়ে দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। যখন ২২৫০ কেজি/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে শোধন করা শিকড়ে দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করে শোধন করা শিকড়ের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, যা ২২.৮১% বৃদ্ধি পেয়েছিল। যখন ৩৭৫০ কেজি/হেক্টর/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছিল। অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করার তুলনায় ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে শোধন করা শিকড়ে দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ ৩৮.৭৭% হ্রাস পেয়েছিল। এছাড়াও, ০.২ মোল·লিটার⁻¹ অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগে দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ ছিল সর্বনিম্ন, যা ছিল ২০৫.৮০ মিলিগ্রাম·গ্রাম⁻¹ (চিত্র ৩)।
ক্যাডমিয়াম চাপের অধীনে প্যানাক্স নটোগিনসেং মূলে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ফলে দ্রবণীয় মোট শর্করা এবং দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণের উপর প্রভাব।
চুন প্রয়োগ এবং অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগের পরিমাণ বৃদ্ধির সাথে সাথে শিকড়ের দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ হ্রাস পেয়েছে। চুন প্রয়োগ ছাড়া, ০.২ মোল/লিটার ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগে দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ নিয়ন্ত্রিত নমুনার তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে ১৬.২০% কমে গিয়েছিল। প্রতি ঘণ্টায় ৭৫০ কেজি চুন প্রয়োগ করা হলে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর শিকড়ের দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখা যায়নি। প্রতি বর্গমিটারে প্রতি ঘণ্টায় ২২৫০ কেজি চুন প্রয়োগের ক্ষেত্রে, ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগে দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগবিহীন নমুনার (৩৫.১১%) চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। যখন প্রতি বর্গমিটারে প্রতি ঘণ্টায় ৩৭৫০ কেজি চুন প্রয়োগ করা হয়, তখন অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে-এর ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায় এবং ০.২ মোল/লিটার ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগে দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ সর্বনিম্ন (২৬৯.৮৪ মাইক্রোগ্রাম/গ্রাম) ছিল। চিকিৎসা (চিত্র ৩)।
চুন প্রয়োগ না করা হলে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। অক্সালিক অ্যাসিডের স্প্রে ঘনত্ব বৃদ্ধি এবং ৭৫০ কেজি/হেক্টর/বর্গমিটার চুন যোগ করার ফলে, মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ প্রথমে হ্রাস পায় এবং তারপর বৃদ্ধি পায়। অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করার পদ্ধতির তুলনায়, ২২৫০ কেজি/হেক্টর চুন এবং ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ফলে মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ ৩৩.৫৮% উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়। অক্সালিক অ্যাসিডের স্প্রে ঘনত্ব বৃদ্ধি এবং ৩৭৫০ কেজি/বর্গমিটার চুন যোগ করার ফলে মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়। অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করার পদ্ধতির তুলনায় ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পদ্ধতিতে মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ ৪৯.৭৬% হ্রাস পায়। অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে ছাড়া মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ ছিল সর্বোচ্চ এবং তা ছিল ২.০৯ মিলিগ্রাম/গ্রাম। ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগে মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিমাণ ছিল সর্বনিম্ন (১.০৫ মিলিগ্রাম/গ্রাম) (চিত্র ৪)।
ক্যাডমিয়াম স্ট্রেস পরিস্থিতিতে প্যানাক্স নটোগিনসেং গাছের পাতায় অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ফলে এর মূলে মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিড এবং প্রোলিনের পরিমাণের উপর প্রভাব।
প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ এবং অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পরিমাণ বৃদ্ধির সাথে সাথে শিকড়ের প্রোলিনের পরিমাণ হ্রাস পেয়েছে। চুন প্রয়োগ না করা হলে প্যানাক্স জিনসেং শিকড়ের প্রোলিনের পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। অক্সালিক অ্যাসিডের স্প্রে ঘনত্ব এবং ৭৫০ বা ২২৫০ কেজি/মি² চুনের প্রয়োগ বাড়ার সাথে সাথে প্রোলিনের পরিমাণ প্রথমে হ্রাস পেয়ে পরে বৃদ্ধি পেয়েছে। ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগের ফলে প্রাপ্ত প্রোলিনের পরিমাণ ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে প্রয়োগের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, যা যথাক্রমে ১৯.৫২% এবং ৪৪.৩৩% বৃদ্ধি পেয়েছে। যখন ৩৭৫০ কেজি/মি² চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন স্প্রেকৃত অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব বাড়ার সাথে সাথে প্রোলিনের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পর, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করার তুলনায় প্রোলিনের পরিমাণ ৫৪.৬৮% হ্রাস পেয়েছে। ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে প্রক্রিয়াজাত করার পর প্রোলিনের পরিমাণ সর্বনিম্ন ছিল, যা ছিল ১১.৩৭ মাইক্রোগ্রাম/গ্রাম (চিত্র ৪)।
প্যানাক্স নটোগিনসেং-এ মোট স্যাপোনিনের পরিমাণ হলো Rg1>Rb1>R1। অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে-এর ক্রমবর্ধমান ঘনত্বের সাথে এবং চুন প্রয়োগ ছাড়া ঘনত্বের ক্ষেত্রে তিনটি স্যাপোনিনের পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না (সারণি ৪)।
০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পর R1-এর পরিমাণ, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করে এবং ৭৫০ বা ৩৭৫০ কেজি/বর্গমিটার চুন প্রয়োগ করার তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল। ০ বা ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ক্ষেত্রে, যোগ করা চুনের পরিমাণ বৃদ্ধির সাথে R1-এর পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ক্ষেত্রে, ৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার চুনে R1-এর পরিমাণ, চুন যোগ না করার ৪৩.৮৪%-এর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল (সারণি ৪)।
অক্সালিক অ্যাসিডের স্প্রে ঘনত্ব বৃদ্ধি এবং ৭৫০ কেজি/মি² চুন যোগ করার ফলে, Rg1-এর পরিমাণ প্রথমে বৃদ্ধি পায় এবং তারপর হ্রাস পায়। ২২৫০ এবং ৩৭৫০ কেজি/ঘণ্টা চুন প্রয়োগের হারে, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে Rg1-এর পরিমাণ হ্রাস পায়। স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের একই ঘনত্বের ক্ষেত্রে, চুনের পরিমাণ বাড়ার সাথে সাথে Rg1-এর পরিমাণ প্রথমে বৃদ্ধি পায় এবং তারপর হ্রাস পায়। নিয়ন্ত্রণের সাথে তুলনা করলে, অক্সালিক অ্যাসিডের তিনটি ঘনত্ব এবং ৭৫০ কেজি/মি² চুন প্রয়োগের ক্ষেত্রে Rg1-এর পরিমাণ নিয়ন্ত্রণের চেয়ে বেশি ছিল, এছাড়া অন্যান্য প্রয়োগে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে Rg1-এর পরিমাণ নিয়ন্ত্রণের চেয়ে কম ছিল। Rg1-এর সর্বোচ্চ পরিমাণ পাওয়া যায় যখন ৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/মি² চুন এবং ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করা হয়, যা নিয়ন্ত্রণের চেয়ে ১১.৫৪% বেশি ছিল (সারণি ৪)।
২২৫০ কেজি/ঘণ্টা প্রবাহ হারে অক্সালিক অ্যাসিডের স্প্রে ঘনত্ব এবং প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ বৃদ্ধির সাথে সাথে, Rb1-এর পরিমাণ প্রথমে বৃদ্ধি পায় এবং তারপর হ্রাস পায়। ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পর, Rb1-এর পরিমাণ সর্বোচ্চ ৩.৪৬%-এ পৌঁছায়, যা অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে না করার তুলনায় ৭৪.৭৫% বেশি ছিল। অন্যান্য চুন প্রয়োগের ক্ষেত্রে, অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রের বিভিন্ন ঘনত্বের মধ্যে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। ০.১ এবং ০.২ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার পর, চুনের পরিমাণ বৃদ্ধির সাথে সাথে Rb1-এর পরিমাণ প্রথমে হ্রাস পায় এবং তারপর হ্রাস পায় (সারণি ৪)।
অক্সালিক অ্যাসিডের একই স্প্রে ঘনত্বে, যোগ করা চুনের পরিমাণ বাড়ার সাথে সাথে ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ প্রথমে বাড়ে এবং তারপর কমে যায়। চুন ছাড়া বিভিন্ন ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড এবং ৩৭৫০ কেজি/মি² চুন স্প্রে করার ক্ষেত্রে ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পরিলক্ষিত হয়নি। ৭৫০ এবং ২২৫০ কেজি/মি² চুন যোগ করার ক্ষেত্রে, স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব বাড়ার সাথে সাথে ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ প্রথমে বাড়ে এবং তারপর কমে যায়। ৭৫০ কেজি/মি² প্রয়োগ করার সময় এবং ০.১ মোল/লিটার ঘনত্বে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ক্ষেত্রে, ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ ছিল সর্বোচ্চ – ৪.৩৮ মিলিগ্রাম/গ্রাম, যা একই পরিমাণ চুন যোগ করার চেয়ে ১৮.৩৮% বেশি, এবং এক্ষেত্রে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার কোনো প্রয়োজন ছিল না। অক্সালিক অ্যাসিড ছাড়া ট্রিটমেন্ট এবং ২২৫০ কেজি/মি² মাত্রায় চুন প্রয়োগের তুলনায়, ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে দিয়ে ট্রিটমেন্ট করার ফলে ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ ২১.৭৪% বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র ৫)।
ক্যাডমিয়াম চাপের অধীনে প্যানাক্স নটোগিনসেং গাছের মূলে ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণের উপর অক্সালেট দিয়ে পাতা স্প্রে করার প্রভাব
দ্বিচলকীয় বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে, প্যানাক্স নটোগিনসেং মূলের দ্রবণীয় শর্করার পরিমাণ প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ এবং স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্বের উপর উল্লেখযোগ্যভাবে নির্ভরশীল ছিল। মূলের দ্রবণীয় প্রোটিনের পরিমাণ চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিডের মাত্রার সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল। মূলের মুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিড এবং প্রোলিনের পরিমাণ প্রয়োগকৃত চুনের পরিমাণ, স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব এবং চুন ও অক্সালিক অ্যাসিডের সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল (সারণি ৫)।
প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে R1-এর পরিমাণ স্প্রে করা অক্সালিক অ্যাসিডের ঘনত্ব, চুনের পরিমাণ এবং প্রয়োগকৃত চুন ও অক্সালিক অ্যাসিডের পরিমাণের উপর উল্লেখযোগ্যভাবে নির্ভরশীল ছিল। ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রের ঘনত্ব এবং যোগ করা চুনের পরিমাণের উপর উল্লেখযোগ্যভাবে নির্ভরশীল ছিল।
মাটিতে ক্যাডমিয়াম আবদ্ধ করার মাধ্যমে উদ্ভিদে ক্যাডমিয়ামের মাত্রা কমাতে অনেক সংশোধক ব্যবহৃত হয়েছে, যেমন চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিড³⁰। ফসলে ক্যাডমিয়ামের মাত্রা কমাতে মাটির সংশোধক হিসেবে চুন ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়³¹। লিয়াং এবং অন্যান্যরা³² রিপোর্ট করেছেন যে ভারী ধাতু দ্বারা দূষিত মাটির প্রতিকারের জন্য অক্সালিক অ্যাসিডও ব্যবহার করা যেতে পারে। দূষিত মাটিতে বিভিন্ন ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড যোগ করার পর, মাটির জৈব পদার্থের পরিমাণ বৃদ্ধি পায়, ক্যাটায়ন বিনিময় ক্ষমতা হ্রাস পায় এবং pH বৃদ্ধি পায়³³। অক্সালিক অ্যাসিড মাটিতে থাকা ধাতব আয়নের সাথেও বিক্রিয়া করতে পারে। ক্যাডমিয়াম (Cd) চাপের পরিস্থিতিতে, নিয়ন্ত্রিত নমুনার তুলনায় প্যানাক্স নটোগিনসেং-এ ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়। তবে, চুন ব্যবহার করলে এটি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়। এই গবেষণায় যখন প্রতি বর্গমিটারে প্রতি ঘণ্টায় ৭৫০ কেজি চুন প্রয়োগ করা হয়েছিল, তখন শিকড়ের ক্যাডমিয়ামের (Cd) পরিমাণ জাতীয় মানদণ্ডে (Cd সীমা Cd≤০.৫ মিলিগ্রাম/কেজি, AQSIQ, GB/T 19086-200834) পৌঁছেছিল এবং এর প্রভাব ভালো ছিল। প্রতি বর্গমিটারে ২২৫০ কেজি চুন যোগ করে সর্বোত্তম ফল পাওয়া যায়। চুন যোগ করার ফলে মাটিতে Ca2+ এবং Cd2+ এর জন্য প্রচুর প্রতিযোগিতামূলক স্থান তৈরি হয় এবং অক্সালিক অ্যাসিড যোগ করলে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর শিকড়ে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ কমে যায়। চুন এবং অক্সালিক অ্যাসিড মেশানোর পর, প্যানাক্স জিনসেং-এর শিকড়ে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে কমে জাতীয় মানদণ্ডে পৌঁছেছিল। মাটিতে থাকা Ca2+ একটি ভর প্রবাহ প্রক্রিয়ার মাধ্যমে শিকড়ের পৃষ্ঠে শোষিত হয় এবং ক্যালসিয়াম চ্যানেল (Ca2+ চ্যানেল), ক্যালসিয়াম পাম্প (Ca2+-AT-Pase) এবং Ca2+/H+ অ্যান্টিপোর্টারের মাধ্যমে শিকড়ের কোষে শোষিত হতে পারে এবং তারপর অনুভূমিকভাবে শিকড়ে পরিবাহিত হয়। জাইলেম২৩। মূলে ক্যালসিয়াম (Ca) এবং ক্যাডমিয়াম (Cd) এর পরিমাণের মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য নেতিবাচক সম্পর্ক ছিল (P < 0.05)। ক্যালসিয়ামের পরিমাণ বৃদ্ধির সাথে ক্যাডমিয়ামের পরিমাণ হ্রাস পেয়েছে, যা ক্যালসিয়াম এবং ক্যাডমিয়ামের মধ্যে বৈরিতার ধারণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। অ্যানোভা (ANOVA) দেখিয়েছে যে চুনের পরিমাণ প্যানাক্স নটোগিনসেং এর মূলে ক্যালসিয়ামের পরিমাণের উপর একটি উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে। পংগ্রাক এট আল. ৩৫ রিপোর্ট করেছেন যে ক্যাডমিয়াম ক্যালসিয়াম অক্সালেট স্ফটিকের অক্সালেটের সাথে আবদ্ধ হয় এবং ক্যালসিয়ামের সাথে প্রতিযোগিতা করে। যাইহোক, ক্যালসিয়ামের উপর অক্সালিক অ্যাসিডের নিয়ন্ত্রক প্রভাব নগণ্য ছিল। এটি দেখায় যে অক্সালিক অ্যাসিড এবং Ca2+ থেকে ক্যালসিয়াম অক্সালেটের অধঃক্ষেপণ একটি সাধারণ অধঃক্ষেপণ নয়, এবং সহ-অধঃক্ষেপণ প্রক্রিয়াটি বিভিন্ন বিপাকীয় পথ দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হতে পারে।
ক্যাডমিয়াম স্ট্রেসের অধীনে, উদ্ভিদে প্রচুর পরিমাণে রিঅ্যাক্টিভ অক্সিজেন স্পিসিস (ROS) তৈরি হয়, যা কোষ পর্দার গঠনকে ক্ষতিগ্রস্ত করে। ম্যালনডাইঅ্যালডিহাইড (MDA) এর পরিমাণ ROS-এর মাত্রা এবং উদ্ভিদের প্লাজমা পর্দার ক্ষতির মাত্রা নির্ণয়ের জন্য একটি সূচক হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সিস্টেম হলো রিঅ্যাক্টিভ অক্সিজেন স্পিসিস অপসারণের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রতিরক্ষামূলক ব্যবস্থা। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমগুলির (POD, SOD, এবং CAT সহ) কার্যকলাপ সাধারণত ক্যাডমিয়াম স্ট্রেসের কারণে পরিবর্তিত হয়। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে MDA-এর পরিমাণ Cd ঘনত্বের সাথে ধনাত্মকভাবে সম্পর্কিত, যা নির্দেশ করে যে Cd ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে উদ্ভিদের পর্দার লিপিড পারঅক্সিডেশনের মাত্রা গভীরতর হয়। এটি Ouyang et al.-এর গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। এই গবেষণাটি দেখায় যে MDA-এর পরিমাণ চুন, অক্সালিক অ্যাসিড এবং চুন ও অক্সালিক অ্যাসিড দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত হয়। ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড নেবুলাইজেশনের পর, প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর MDA-এর পরিমাণ হ্রাস পায়, যা নির্দেশ করে যে অক্সালিক অ্যাসিড প্যানাক্স নটোগিনসেং-এ Cd-এর জৈবপ্রাপ্যতা এবং ROS-এর মাত্রা কমাতে পারে। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম সিস্টেম হলো সেই স্থান যেখানে উদ্ভিদের বিষমুক্তকরণ কার্য সম্পাদন হয়। SOD উদ্ভিদ কোষে থাকা O2- অপসারণ করে এবং অ-বিষাক্ত O2 ও স্বল্প-বিষাক্ত H2O2 উৎপাদন করে। POD এবং CAT উদ্ভিদ কলা থেকে H2O2 অপসারণ করে এবং H2O2-কে H2O-তে বিয়োজিত করার প্রক্রিয়াকে অনুঘটক হিসেবে কাজ করে। iTRAQ প্রোটিওম বিশ্লেষণের উপর ভিত্তি করে দেখা গেছে যে, Cd40 স্ট্রেসের অধীনে চুন প্রয়োগের পর SOD এবং PAL-এর প্রোটিন এক্সপ্রেশন লেভেল হ্রাস পেয়েছে এবং POD-এর এক্সপ্রেশন লেভেল বৃদ্ধি পেয়েছে। প্যানাক্স নটোগিনসেং-এর মূলে CAT, SOD এবং POD-এর কার্যকলাপ অক্সালিক অ্যাসিড এবং চুনের ডোজ দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত হয়েছিল। ০.১ মোল/লিটার অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ফলে SOD এবং CAT-এর সক্রিয়তা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়, কিন্তু POD-এর সক্রিয়তার উপর এর নিয়ন্ত্রক প্রভাব সুস্পষ্ট ছিল না। এটি দেখায় যে অক্সালিক অ্যাসিড ক্যাডমিয়াম (Cd) চাপের অধীনে ROS-এর পচনকে ত্বরান্বিত করে এবং প্রধানত CAT-এর সক্রিয়তা নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে H2O2 অপসারণ সম্পন্ন করে, যা সিউডোস্পার্মাম সাইবেরিকাম কোস (Pseudospermum sibiricum Kos.)-এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের উপর গুও ​​এট আল.⁴¹-এর গবেষণার ফলাফলের অনুরূপ। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সিস্টেমের এনজাইমের সক্রিয়তা এবং ম্যালনডাইঅ্যালডিহাইডের পরিমাণের উপর ৭৫০ কেজি/ঘণ্টা/বর্গমিটার চুন প্রয়োগের প্রভাব অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার প্রভাবের অনুরূপ। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে অক্সালিক অ্যাসিড স্প্রে করার ফলে প্যানাক্স নটোগিনসেং-এ SOD এবং CAT-এর সক্রিয়তা আরও কার্যকরভাবে বৃদ্ধি পেতে পারে এবং এর চাপ প্রতিরোধ ক্ষমতা বাড়াতে পারে। 0.2 mol L-1 অক্সালিক অ্যাসিড এবং 3750 kg hm-2 চুন প্রয়োগের ফলে SOD এবং POD এর কার্যকলাপ হ্রাস পেয়েছে, যা ইঙ্গিত করে যে উচ্চ ঘনত্বের অক্সালিক অ্যাসিড এবং Ca2+ এর অতিরিক্ত স্প্রে উদ্ভিদে পীড়ন সৃষ্টি করতে পারে, যা লুও এবং অন্যান্যদের গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। ওয়েট 42।