nature.com-এ আসার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন, তাতে CSS-এর সমর্থন সীমিত। সর্বোত্তম অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে ব্রাউজারের সর্বশেষ সংস্করণ ব্যবহার করার (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে কম্প্যাটিবিলিটি মোড বন্ধ করার) পরামর্শ দিচ্ছি। এছাড়াও, সাইটের নিরবচ্ছিন্ন সমর্থন নিশ্চিত করার জন্য, এই সাইটে কোনো স্টাইল বা জাভাস্ক্রিপ্ট অন্তর্ভুক্ত করা হবে না।
হাইড্রোজেন সালফাইড (H2S) মানবদেহে একাধিক শারীরবৃত্তীয় এবং রোগতাত্ত্বিক প্রভাব ফেলে। জৈবিক পরীক্ষায় H2S-এর প্রভাব মূল্যায়নের জন্য সোডিয়াম হাইড্রোসালফাইড (NaHS) একটি ঔষধবিজ্ঞানীয় উপকরণ হিসেবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। যদিও NaHS দ্রবণ থেকে H2S অপসারিত হতে মাত্র কয়েক মিনিট সময় লাগে, কিছু প্রাণী গবেষণায় পানীয় জলে H2S-এর দাতা যৌগ হিসেবে NaHS দ্রবণ ব্যবহৃত হয়েছে। এই গবেষণায় অনুসন্ধান করা হয়েছে যে, কিছু লেখকের পরামর্শ অনুযায়ী, ইঁদুর/মূষিকের বোতলে প্রস্তুতকৃত ৩০ μM NaHS ঘনত্বের পানীয় জল অন্তত ১২-২৪ ঘণ্টা স্থিতিশীল থাকতে পারে কি না। পানীয় জলে NaHS (৩০ μM)-এর একটি দ্রবণ প্রস্তুত করে তা অবিলম্বে ইঁদুর/মূষিকের জলের বোতলে ঢেলে দেওয়া হয়। মিথিলিন ব্লু পদ্ধতি ব্যবহার করে সালফাইডের পরিমাণ পরিমাপ করার জন্য ০, ১, ২, ৩, ৪, ৫, ৬, ১২ এবং ২৪ ঘণ্টায় জলের বোতলের মুখ এবং ভেতর থেকে নমুনা সংগ্রহ করা হয়। এছাড়াও, পুরুষ ও স্ত্রী ইঁদুরদের দুই সপ্তাহ ধরে NaHS (৩০ μM) ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং প্রথম সপ্তাহে একদিন পরপর ও দ্বিতীয় সপ্তাহের শেষে সিরাম সালফাইডের ঘনত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল। জলের বোতলের মুখ থেকে নেওয়া নমুনার NaHS দ্রবণটি অস্থিতিশীল ছিল; এটি যথাক্রমে ১২ এবং ২৪ ঘণ্টা পরে ৭২% এবং ৭৫% কমে গিয়েছিল। জলের বোতলের ভেতর থেকে নেওয়া নমুনাগুলিতে, ২ ঘণ্টার মধ্যে NaHS-এর হ্রাস উল্লেখযোগ্য ছিল না; তবে, এটি যথাক্রমে ১২ এবং ২৪ ঘণ্টা পরে ৪৭% এবং ৭২% কমে গিয়েছিল। NaHS ইনজেকশন পুরুষ ও স্ত্রী ইঁদুরের সিরাম সালফাইডের মাত্রাকে প্রভাবিত করেনি। উপসংহারে বলা যায়, পানীয় জল থেকে প্রস্তুত NaHS দ্রবণ H2S দানের জন্য ব্যবহার করা উচিত নয়, কারণ এই দ্রবণটি অস্থিতিশীল। প্রয়োগের এই পদ্ধতি প্রাণীদেরকে অনিয়মিত এবং প্রত্যাশিত পরিমাণের চেয়ে কম NaHS-এর সংস্পর্শে আনবে।
হাইড্রোজেন সালফাইড (H2S) ১৭০০ সাল থেকে বিষাক্ত পদার্থ হিসেবে ব্যবহৃত হয়ে আসছে; তবে, একটি অন্তঃসৃষ্ট জৈব-সংকেত অণু হিসেবে এর সম্ভাব্য ভূমিকা ১৯৯৬ সালে আবে এবং কিমুরা বর্ণনা করেন। গত তিন দশকে, মানুষের বিভিন্ন তন্ত্রে H2S-এর অসংখ্য কার্যকারিতা উদ্ঘাটিত হয়েছে, যার ফলে এই উপলব্ধি হয়েছে যে, নির্দিষ্ট কিছু রোগের চিকিৎসা বা ব্যবস্থাপনায় H2S দাতা অণুগুলোর চিকিৎসাগত প্রয়োগ থাকতে পারে; সাম্প্রতিক একটি পর্যালোচনার জন্য চিরিনো প্রমুখের কাজ দেখুন।
সোডিয়াম হাইড্রোসালফাইড (NaHS) অনেক কোষ কালচার এবং প্রাণী গবেষণায় H2S-এর প্রভাব মূল্যায়নের জন্য একটি ফার্মাকোলজিক্যাল উপকরণ হিসেবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়ে আসছে৫,৬,৭,৮। তবে, NaHS একটি আদর্শ H2S দাতা নয় কারণ এটি দ্রবণে দ্রুত H2S/HS- এ রূপান্তরিত হয়, সহজেই পলিসালফাইড দ্বারা দূষিত হয় এবং সহজেই জারিত ও বাষ্পীভূত হয়৪,৯। অনেক জৈবিক পরীক্ষায়, NaHS জলে দ্রবীভূত করা হয়, যার ফলে নিষ্ক্রিয় বাষ্পীভবন এবং H2S-এর ক্ষয়১০,১১,১২, H2S-এর স্বতঃস্ফূর্ত জারণ১১,১২,১৩ এবং ফটোলাইসিস১৪ ঘটে। H2S-এর বাষ্পীভবনের কারণে মূল দ্রবণের সালফাইড খুব দ্রুত হারিয়ে যায়১১। একটি খোলা পাত্রে, H2S-এর অর্ধায়ু (t1/2) প্রায় ৫ মিনিট, এবং এর ঘনত্ব প্রতি মিনিটে প্রায় ১৩% হ্রাস পায়১০। যদিও NaHS দ্রবণ থেকে হাইড্রোজেন সালফাইড নির্গত হতে মাত্র কয়েক মিনিট সময় লাগে, কিছু প্রাণী গবেষণায় ১-২১ সপ্তাহ ধরে পানীয় জলে হাইড্রোজেন সালফাইডের উৎস হিসেবে NaHS দ্রবণ ব্যবহার করা হয়েছে এবং প্রতি ১২-২৪ ঘণ্টা পর পর NaHS-যুক্ত দ্রবণটি পরিবর্তন করা হয়েছে।¹⁵,¹⁶,¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹,²²,²⁴,²⁵,²⁶ এই পদ্ধতিটি বৈজ্ঞানিক গবেষণার নীতির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ নয়, কারণ ওষুধের মাত্রা অন্যান্য প্রজাতি, বিশেষ করে মানুষের উপর এর ব্যবহারের উপর ভিত্তি করে নির্ধারণ করা উচিত।²⁷
বায়োমেডিসিনে প্রাক-ক্লিনিক্যাল গবেষণার লক্ষ্য হলো রোগীর যত্নের মান বা চিকিৎসার ফলাফল উন্নত করা। তবে, বেশিরভাগ প্রাণী গবেষণার ফলাফল এখনও মানুষের উপর প্রয়োগ করা সম্ভব হয়নি২৮,২৯,৩০। এই প্রয়োগগত ব্যর্থতার অন্যতম কারণ হলো প্রাণী গবেষণার পদ্ধতিগত মানের প্রতি মনোযোগের অভাব৩০। তাই, এই গবেষণার উদ্দেশ্য ছিল এটি অনুসন্ধান করা যে, ইঁদুর/মূষিকের জলের বোতলে প্রস্তুত ৩০ μM NaHS দ্রবণ পানীয় জলে ১২-২৪ ঘণ্টা পর্যন্ত স্থিতিশীল থাকতে পারে কিনা, যেমনটি কিছু গবেষণায় দাবি বা প্রস্তাব করা হয়েছে।
এই গবেষণার সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা ইরানে পরীক্ষাগারের প্রাণীদের যত্ন ও ব্যবহারের জন্য প্রকাশিত নির্দেশিকা³¹ অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল। এই গবেষণার সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রতিবেদন ARRIVE নির্দেশিকা³²-ও অনুসরণ করেছে। শহীদ বেহেশতি ইউনিভার্সিটি অফ মেডিকেল সায়েন্সেস-এর ইনস্টিটিউট অফ এন্ডোক্রাইন সায়েন্সেস-এর এথিক্স কমিটি এই গবেষণার সমস্ত পরীক্ষামূলক পদ্ধতি অনুমোদন করেছে।
জিঙ্ক অ্যাসিটেট ডাইহাইড্রেট (CAS: 5970-45-6) এবং অ্যানহাইড্রাস ফেরিক ক্লোরাইড (CAS: 7705-08-0) বায়োকেম, কেমোপাহরামা (কসনে-সুর-লোয়ার, ফ্রান্স) থেকে কেনা হয়েছিল। সোডিয়াম হাইড্রোসালফাইড হাইড্রেট (CAS: 207683-19-0) এবং এন,এন-ডাইমিথাইল-পি-ফেনাইলিনডায়ামিন (DMPD) (CAS: 535-47-0) সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল। আইসোফ্লুরেন পিরামাল (বেথলেহেম, পিএ, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল। হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড (HCl) মার্ক (ডার্মস্ট্যাড, জার্মানি) থেকে কেনা হয়েছিল।
পানীয় জলে NaHS (৩০ μM) এর একটি দ্রবণ প্রস্তুত করুন এবং অবিলম্বে এটি ইঁদুর/মূষিকের জলের বোতলগুলিতে ঢেলে দিন। H2S এর উৎস হিসাবে NaHS ব্যবহার করে অসংখ্য প্রকাশনার উপর ভিত্তি করে এই ঘনত্বটি নির্বাচন করা হয়েছে; আলোচনা বিভাগটি দেখুন। NaHS একটি হাইড্রেটেড অণু যা বিভিন্ন পরিমাণে হাইড্রেটেড জল ধারণ করতে পারে (অর্থাৎ, NaHS•xH2O); প্রস্তুতকারকের মতে, আমাদের গবেষণায় ব্যবহৃত NaHS এর শতাংশ ছিল ৭০.৭% (অর্থাৎ, NaHS•১.৩ H2O), এবং আমরা আমাদের গণনায় এই মানটি বিবেচনায় নিয়েছি, যেখানে আমরা ৫৬.০৬ গ্রাম/মোল আণবিক ওজন ব্যবহার করেছি, যা অনার্দ্র NaHS এর আণবিক ওজন। হাইড্রেটেড জল (কেলাসিত জলও বলা হয়) হল জলের অণু যা স্ফটিক কাঠামো তৈরি করে। অনার্দ্র পদার্থের তুলনায় হাইড্রেটেড পদার্থের ভৌত এবং তাপগতিবিদ্যার বৈশিষ্ট্য ভিন্ন।
পানীয় জলে NaHS যোগ করার আগে, দ্রাবকটির pH এবং তাপমাত্রা পরিমাপ করুন। অবিলম্বে প্রাণীর খাঁচায় থাকা ইঁদুর/মূষিকের জলের বোতলে NaHS দ্রবণটি ঢেলে দিন। সালফাইডের পরিমাণ পরিমাপ করার জন্য ০, ১, ২, ৩, ৪, ৫, ৬, ১২, এবং ২৪ ঘণ্টায় জলের বোতলের অগ্রভাগ এবং ভেতর থেকে নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনা সংগ্রহের পরপরই সালফাইডের পরিমাপ নেওয়া হয়েছিল। আমরা নলের অগ্রভাগ থেকে নমুনা সংগ্রহ করেছি কারণ কিছু গবেষণায় দেখা গেছে যে জলের নলের ছোট ছিদ্রের আকার H2S বাষ্পীভবন কমাতে পারে¹⁵,¹⁹। এই বিষয়টি বোতলের ভেতরের দ্রবণের ক্ষেত্রেও প্রযোজ্য বলে মনে হয়। তবে, জলের বোতলের মুখের দ্রবণের ক্ষেত্রে এটি প্রযোজ্য ছিল না, যার বাষ্পীভবনের হার বেশি ছিল এবং যা স্বতঃজারিত হচ্ছিল; প্রকৃতপক্ষে, প্রাণীগুলো প্রথমে এই জলই পান করেছিল।
এই গবেষণায় পুরুষ ও স্ত্রী উইস্টার ইঁদুর ব্যবহার করা হয়েছিল। ইঁদুরগুলোকে পলিপ্রোপিলিন খাঁচায় (প্রতি খাঁচায় ২-৩টি ইঁদুর) আদর্শ পরিবেশে (তাপমাত্রা ২১-২৬ °C, আর্দ্রতা ৩২-৪০%) রাখা হয়েছিল, যেখানে ১২ ঘণ্টা আলো (সকাল ৭টা থেকে সন্ধ্যা ৭টা) এবং ১২ ঘণ্টা অন্ধকার (সন্ধ্যা ৭টা থেকে সকাল ৭টা) ছিল। ইঁদুরগুলোর জন্য কলের জল সহজলভ্য ছিল এবং তাদের আদর্শ খাবার (খোরাক ড্যাম পার্স কোম্পানি, তেহরান, ইরান) খাওয়ানো হয়েছিল। সমবয়সী (৬ মাস) স্ত্রী (n=১০, দৈহিক ওজন: ১৯০-২৩০ গ্রাম) এবং পুরুষ (n=১০, দৈহিক ওজন: ৩২০-৩৭০ গ্রাম) উইস্টার ইঁদুরগুলোকে দৈবচয়নের ভিত্তিতে কন্ট্রোল এবং NaHS (৩০ μM) প্রয়োগকৃত দলে (প্রতি দলে n=৫) ভাগ করা হয়েছিল। নমুনার আকার নির্ধারণের জন্য, আমরা KISS (Keep It Simple, Stupid) পদ্ধতি ব্যবহার করেছি, যা পূর্ব অভিজ্ঞতা এবং পাওয়ার অ্যানালাইসিসকে একত্রিত করে। আমরা প্রথমে ৩টি ইঁদুরের উপর একটি পাইলট স্টাডি পরিচালনা করি এবং গড় সিরাম টোটাল সালফাইড লেভেল ও স্ট্যান্ডার্ড ডেভিয়েশন (৮.১ ± ০.৮১ μM) নির্ধারণ করি। তারপর, ৮০% পাওয়ার বিবেচনা করে এবং একটি দ্বি-পার্শ্বীয় ৫% সিগনিফিকেন্স লেভেল ধরে নিয়ে, আমরা একটি প্রাথমিক স্যাম্পল সাইজ (পূর্ববর্তী গবেষণার উপর ভিত্তি করে n = ৫) নির্ধারণ করি, যা পরীক্ষামূলক প্রাণীর স্যাম্পল সাইজ গণনার জন্য ফেস্টং দ্বারা প্রস্তাবিত পূর্বনির্ধারিত মান³⁵ অনুযায়ী ২.০২-এর একটি স্ট্যান্ডার্ডাইজড এফেক্ট সাইজের সাথে সঙ্গতিপূর্ণ ছিল। এই মানটিকে এসডি (২.০২ × ০.৮১) দ্বারা গুণ করার পর, পূর্বাভাসিত শনাক্তযোগ্য এফেক্ট সাইজ (১.৬ μM) ছিল ২০%, যা গ্রহণযোগ্য। এর মানে হলো, গ্রুপগুলোর মধ্যে ২০% গড় পরিবর্তন শনাক্ত করার জন্য প্রতি গ্রুপে n = ৫ যথেষ্ট। এক্সেল সফটওয়্যারের র‍্যান্ডম ফাংশন³⁶ (পরিপূরক চিত্র ১) ব্যবহার করে ইঁদুরগুলোকে র‍্যান্ডমভাবে কন্ট্রোল এবং NaSH-চিকিৎসিত গ্রুপে ভাগ করা হয়েছিল। ফলাফলের পর্যায়ে ব্লাইন্ডিং করা হয়েছিল, এবং জৈব-রাসায়নিক পরিমাপ সম্পাদনকারী গবেষকরা গ্রুপ অ্যাসাইনমেন্ট সম্পর্কে অবগত ছিলেন না।
উভয় লিঙ্গের NaHS গ্রুপকে ২ সপ্তাহ ধরে পানীয় জলে প্রস্তুতকৃত ৩০ μM NaHS দ্রবণ দিয়ে চিকিৎসা করা হয়েছিল; প্রতি ২৪ ঘণ্টা পর পর নতুন দ্রবণ সরবরাহ করা হতো এবং এই সময়ে তাদের দেহের ওজন পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রথম এবং দ্বিতীয় সপ্তাহের শেষে, আইসোফ্লুরেন অ্যানেস্থেসিয়ার অধীনে সমস্ত ইঁদুরের লেজের ডগা থেকে একদিন পরপর রক্তের নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। রক্তের নমুনাগুলোকে ৩০০০ g গতিতে ১০ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, সিরাম আলাদা করে পরবর্তীকালে সিরাম ইউরিয়া, ক্রিয়েটিনিন (Cr) এবং মোট সালফাইড পরিমাপের জন্য –৮০°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। সিরাম ইউরিয়া এনজাইমেটিক ইউরেজ পদ্ধতিতে এবং সিরাম ক্রিয়েটিনিন ফটোমেট্রিক জাফে পদ্ধতিতে নির্ণয় করা হয়েছিল। এর জন্য বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ কিট (ম্যান কোম্পানি, তেহরান, ইরান) এবং একটি স্বয়ংক্রিয় অ্যানালাইজার (সিলেক্ট্রা ই, সিরিয়াল নম্বর ০-২১২৪, নেদারল্যান্ডস) ব্যবহার করা হয়েছিল। ইউরিয়া এবং Cr-এর জন্য ইন্ট্রা- এবং ইন্টারঅ্যাসে কোএফিসিয়েন্ট অফ ভ্যারিয়েশন ২.৫%-এর কম ছিল।
মিথিলিন ব্লু (MB) পদ্ধতিটি NaHS যুক্ত পানীয় জল এবং সিরামে মোট সালফাইড পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়; বাল্ক দ্রবণ এবং জৈবিক নমুনায় সালফাইড পরিমাপের জন্য MB সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত পদ্ধতি¹¹,³⁷। MB পদ্ধতিটি মোট সালফাইড পুলের পরিমাণ অনুমান করতে³⁸ এবং জলীয় দশায় H₂S, HS⁻ এবং S₂ আকারে অজৈব সালফাইড পরিমাপ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে³⁹। এই পদ্ধতিতে, জিঙ্ক অ্যাসিটেটের উপস্থিতিতে সালফার জিঙ্ক সালফাইড (ZnS) হিসাবে অধঃক্ষিপ্ত হয়¹¹,³⁸। অন্যান্য ক্রোমোফোর থেকে সালফাইড পৃথক করার জন্য জিঙ্ক অ্যাসিটেট অধঃক্ষেপণ সবচেয়ে বহুল ব্যবহৃত পদ্ধতি¹¹। তীব্র অম্লীয় অবস্থায় HCl¹¹ ব্যবহার করে ZnS পুনরায় দ্রবীভূত করা হয়েছিল। ফেরিক ক্লোরাইড দ্বারা অনুঘটকিত একটি বিক্রিয়ায় (Fe3+ জারক পদার্থ হিসেবে কাজ করে) সালফাইড DMPD-এর সাথে 1:2 স্টোইকিওমেট্রিক অনুপাতে বিক্রিয়া করে MB রঞ্জক তৈরি করে, যা 670 nm-এ স্পেকট্রোফটোমেট্রিকভাবে শনাক্ত করা হয়40,41। MB পদ্ধতির শনাক্তকরণ সীমা প্রায় 1 μM11।
এই গবেষণায়, প্রতিটি নমুনার (দ্রবণ বা সিরাম) ১০০ μL একটি টিউবে নেওয়া হয়েছিল; তারপর ২০০ μL জিঙ্ক অ্যাসিটেট (পাতিত জলে ১% w/v), ১০০ μL DMPD (৭.২ M HCl-এ ২০ mM), এবং ১৩৩ μL FeCl3 (১.২ M HCl-এ ৩০ mM) যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ৩৭°C তাপমাত্রায় অন্ধকারে ৩০ মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। দ্রবণটিকে ১০,০০০ g-তে ১০ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (BioTek, MQX2000R2, Winooski, VT, USA) ব্যবহার করে সুপারন্যাট্যান্টের অ্যাবজরবেন্স ৬৭০ nm-এ পাঠ করা হয়েছিল। ddH2O-তে NaHS (০–১০০ μM)-এর একটি ক্যালিব্রেশন কার্ভ (পরিপূরক চিত্র ২) ব্যবহার করে সালফাইডের ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল। পরিমাপের জন্য ব্যবহৃত সমস্ত দ্রবণ সদ্য প্রস্তুত করা হয়েছিল। সালফাইড পরিমাপের জন্য ইন্ট্রা- এবং ইন্টারঅ্যাসে কোএফিসিয়েন্ট অফ ভ্যারিয়েশন ছিল যথাক্রমে ২.৮% এবং ৩.৪%। আমরা ফর্টিফায়েড স্যাম্পল মেথড৪২ ব্যবহার করে সোডিয়াম থায়োসালফেট-যুক্ত পানীয় জল এবং সিরামের নমুনা থেকে পুনরুদ্ধারকৃত মোট সালফাইডের পরিমাণও নির্ণয় করেছি। সোডিয়াম থায়োসালফেট-যুক্ত পানীয় জল এবং সিরামের নমুনা থেকে পুনরুদ্ধারের হার ছিল যথাক্রমে ৯১ ± ১.১% (n = ৬) এবং ৯৩ ± ২.৪% (n = ৬)।
উইন্ডোজের জন্য গ্রাফপ্যাড প্রিজম সফটওয়্যার সংস্করণ ৮.০.২ (গ্রাফপ্যাড সফটওয়্যার, স্যান ডিয়েগো, সিএ, ইউএসএ, www.graphpad.com) ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। NaHS যোগ করার আগে ও পরে পানীয় জলের তাপমাত্রা এবং pH তুলনা করার জন্য একটি পেয়ার্ড টি-টেস্ট ব্যবহার করা হয়েছিল। NaHS-যুক্ত দ্রবণে H2S-এর ক্ষয়কে বেসলাইন আপটেক থেকে শতকরা হ্রাস হিসাবে গণনা করা হয়েছিল, এবং এই ক্ষয় পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ কিনা তা মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা একটি ওয়ান-ওয়ে রিপিটেড-মেজারস অ্যানোভা এবং তারপরে ডানেটের মাল্টিপল কম্প্যারিসন টেস্ট সম্পাদন করেছি। সময়ের সাথে সাথে শরীরের ওজন, সিরাম ইউরিয়া, সিরাম ক্রিয়েটিনিন এবং মোট সিরাম সালফাইডকে বিভিন্ন লিঙ্গের কন্ট্রোল এবং NaHS-চিকিৎসাপ্রাপ্ত ইঁদুরের মধ্যে একটি টু-ওয়ে মিক্সড (বিটুইন-উইদিন) অ্যানোভা এবং তারপরে একটি বনফেরোনি পোস্ট হক টেস্ট ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল। টু-টেইলড P মান < ০.০৫ পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।
NaHS যোগ করার আগে পানীয় জলের pH ছিল ৭.৬০ ± ০.০১ এবং NaHS যোগ করার পরে ছিল ৭.৭১ ± ০.০৩ (n = ১৩, p = ০.০০২৯)। পানীয় জলের তাপমাত্রা ছিল ২৬.৫ ± ০.২ এবং NaHS যোগ করার পরে তা কমে ২৬.২ ± ০.২ হয় (n = ১৩, p = ০.০১২৮)। পানীয় জলে ৩০ μM NaHS দ্রবণ প্রস্তুত করে একটি জলের বোতলে সংরক্ষণ করুন। NaHS দ্রবণ অস্থিতিশীল এবং সময়ের সাথে সাথে এর ঘনত্ব হ্রাস পায়। জলের বোতলের মুখ থেকে নমুনা নেওয়ার সময়, প্রথম ঘণ্টার মধ্যেই একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস (৬৮.০%) লক্ষ্য করা গেছে, এবং দ্রবণে NaHS-এর পরিমাণ যথাক্রমে ১২ এবং ২৪ ঘণ্টা পরে ৭২% এবং ৭৫% কমে গেছে। পানির বোতল থেকে সংগৃহীত নমুনাগুলিতে, ২ ঘন্টা পর্যন্ত NaHS-এর হ্রাস উল্লেখযোগ্য ছিল না, কিন্তু ১২ এবং ২৪ ঘন্টা পরে এটি যথাক্রমে ৪৭% এবং ৭২% হ্রাস পেয়েছিল। এই তথ্য নির্দেশ করে যে, নমুনা সংগ্রহের স্থান নির্বিশেষে, পানীয় জলে প্রস্তুত একটি ৩০ μM দ্রবণে NaHS-এর শতাংশ ২৪ ঘন্টা পরে প্রাথমিক মানের প্রায় এক-চতুর্থাংশে নেমে এসেছিল (চিত্র ১)।
ইঁদুর/মূষিকের বোতলে রাখা পানীয় জলে NaHS দ্রবণের (৩০ μM) স্থিতিশীলতা। দ্রবণ তৈরির পর, জলের বোতলের অগ্রভাগ এবং ভেতর থেকে নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। প্রাপ্ত তথ্য গড় ± আদর্শ বিচ্যুতি (n = ৬/দল) হিসেবে উপস্থাপন করা হয়েছে। * এবং #, সময় ০-এর তুলনায় P < ০.০৫। জলের বোতলটির ছবিতে এর অগ্রভাগ (মুখসহ) এবং বোতলের মূল অংশ দেখানো হয়েছে। অগ্রভাগের আয়তন প্রায় ৭৪০ μL।
সদ্য প্রস্তুতকৃত ৩০ μM দ্রবণে NaHS-এর ঘনত্ব ছিল ৩০.৩ ± ০.৪ μM (পরিসর: ২৮.৭–৩১.৯ μM, n = ১২)। তবে, ২৪ ঘণ্টা পর NaHS-এর ঘনত্ব কমে একটি নিম্নতর মানে পৌঁছায় (গড়: ৩.০ ± ০.৬ μM)। চিত্র ২-এ যেমন দেখানো হয়েছে, গবেষণাকালীন সময়ে ইঁদুরগুলোকে যে NaHS-এর ঘনত্বের সংস্পর্শে আনা হয়েছিল তা স্থির ছিল না।
সময়ের সাথে সাথে স্ত্রী ইঁদুরদের দৈহিক ওজন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (কন্ট্রোল গ্রুপে ২০৫.২ ± ৫.২ গ্রাম থেকে ২১৩.৮ ± ৭.০ গ্রাম এবং NaHS-প্রয়োগকৃত গ্রুপে ২০৪.০ ± ৮.৬ গ্রাম থেকে ২১১.৮ ± ৭.৫ গ্রাম); তবে, NaHS প্রয়োগ দৈহিক ওজনের উপর কোনো প্রভাব ফেলেনি (চিত্র ৩)। সময়ের সাথে সাথে পুরুষ ইঁদুরদের দৈহিক ওজন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (কন্ট্রোল গ্রুপে ৩৩৮.৬ ± ৮.৩ গ্রাম থেকে ৩৫২.৪ ± ৬.০ গ্রাম এবং NaHS-প্রয়োগকৃত গ্রুপে ৩৫২.৪ ± ৫.৯ গ্রাম থেকে ৩৬৩.২ ± ৪.৩ গ্রাম); তবে, NaHS প্রয়োগ দৈহিক ওজনের উপর কোনো প্রভাব ফেলেনি (চিত্র ৩)।
NaHS (৩০ μM) প্রয়োগের পর স্ত্রী ও পুরুষ ইঁদুরের দৈহিক ওজনের পরিবর্তন। উপাত্ত গড় ± SEM হিসেবে উপস্থাপন করা হয়েছে এবং বনফেরোনি পোস্ট হক টেস্ট সহ দ্বি-মুখী মিশ্র (অভ্যন্তরীণ-আন্তঃ) ভেদাঙ্ক বিশ্লেষণ ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছে। প্রতিটি গ্রুপে উভয় লিঙ্গের নমুনা সংখ্যা ছিল n = ৫।
গবেষণা চলাকালীন সময়ে কন্ট্রোল এবং NaSH-চিকিৎসাপ্রাপ্ত ইঁদুরদের সিরাম ইউরিয়া এবং ক্রিয়েটিন ফসফেটের ঘনত্ব তুলনীয় ছিল। অধিকন্তু, NaSH চিকিৎসা সিরাম ইউরিয়া এবং ক্রিয়েটিনক্রোমের ঘনত্বকে প্রভাবিত করেনি (সারণি ১)।
নিয়ন্ত্রিত এবং NaHS-চিকিৎসাপ্রাপ্ত পুরুষ (৮.১ ± ০.৫ μM বনাম ৯.৩ ± ০.২ μM) এবং স্ত্রী (৯.১ ± ১.০ μM বনাম ৬.১ ± ১.১ μM) ইঁদুরের মধ্যে ভিত্তিগত সিরাম মোট সালফাইড ঘনত্ব তুলনীয় ছিল। ১৪ দিন ধরে NaHS প্রয়োগ পুরুষ বা স্ত্রী কোনো ইঁদুরেরই সিরাম মোট সালফাইড স্তরের উপর কোনো প্রভাব ফেলেনি (চিত্র ৪)।
NaHS (৩০ μM) প্রয়োগের পর পুরুষ ও স্ত্রী ইঁদুরের সিরামে মোট সালফাইড ঘনত্বের পরিবর্তন। উপাত্ত গড় ± SEM হিসেবে উপস্থাপন করা হয়েছে এবং বনফেরোনি পোস্ট হক টেস্ট সহ একটি দ্বি-মুখী মিশ্র (অভ্যন্তরীণ-অভ্যন্তরীণ) ভেদাঙ্ক বিশ্লেষণ ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছে। প্রতিটি লিঙ্গ, n = ৫/দল।
এই গবেষণার মূল উপসংহার হলো যে NaHS যুক্ত পানীয় জল অস্থিতিশীল: ইঁদুর/মূষিকের জলের বোতলের মুখ এবং ভেতর থেকে নমুনা সংগ্রহের ২৪ ঘণ্টা পর প্রাথমিক মোট সালফাইড উপাদানের মাত্র প্রায় এক-চতুর্থাংশ শনাক্ত করা যায়। অধিকন্তু, NaHS দ্রবণ থেকে H2S অপসারিত হওয়ার কারণে ইঁদুরগুলো অস্থিতিশীল NaHS ঘনত্বের সংস্পর্শে এসেছিল, এবং পানীয় জলে NaHS যোগ করা তাদের দেহের ওজন, সিরাম ইউরিয়া ও ক্রিয়েটিন ক্রোমিয়াম, বা মোট সিরাম সালফাইডের উপর কোনো প্রভাব ফেলেনি।
এই গবেষণায়, পানীয় জলে প্রস্তুত ৩০ μM NaHS দ্রবণ থেকে H2S ক্ষয়ের হার ছিল প্রতি ঘণ্টায় প্রায় ৩%। একটি বাফার দ্রবণে (১০ mM PBS-এ ১০০ μM সোডিয়াম সালফাইড, pH ৭.৪), সালফাইডের ঘনত্ব ৮ ঘণ্টায় সময়ের সাথে সাথে ৭% হ্রাস পায় বলে জানা গেছে¹¹। আমরা পূর্বে NaHS-এর ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল প্রয়োগকে সমর্থন করে জানিয়েছি যে, পানীয় জলে ৫৪ μM NaHS দ্রবণ থেকে সালফাইড ক্ষয়ের হার ছিল প্রতি ঘণ্টায় প্রায় ২.৩% (প্রস্তুতির পর প্রথম ১২ ঘণ্টায় ৪%/ঘণ্টা এবং শেষ ১২ ঘণ্টায় ১.৪%/ঘণ্টা)⁸। পূর্ববর্তী গবেষণা⁴³-তে NaHS দ্রবণ থেকে H2S-এর একটি স্থির ক্ষয় পাওয়া গেছে, যা মূলত বাষ্পীভবন এবং জারণের কারণে ঘটে। এমনকি বুদবুদ যোগ না করলেও, H2S-এর বাষ্পীভবনের কারণে স্টক দ্রবণের সালফাইড দ্রুত ক্ষয় হয়ে যায়¹¹। গবেষণায় দেখা গেছে যে, লঘুকরণ প্রক্রিয়ার সময়, যা প্রায় ৩০-৬০ সেকেন্ড সময় নেয়, প্রায় ৫-১০% H2S বাষ্পীভবনের কারণে নষ্ট হয়ে যায়। দ্রবণ থেকে H2S-এর বাষ্পীভবন রোধ করতে, গবেষকরা বেশ কিছু ব্যবস্থা নিয়েছেন, যার মধ্যে রয়েছে দ্রবণটিকে আলতোভাবে নাড়ানো, মূল দ্রবণটিকে প্লাস্টিক ফিল্ম দিয়ে ঢেকে রাখা এবং দ্রবণটিকে বাতাসের সংস্পর্শ থেকে দূরে রাখা, কারণ H2S-এর বাষ্পীভবনের হার বায়ু-তরল আন্তঃপৃষ্ঠের উপর নির্ভর করে। H2S-এর স্বতঃস্ফূর্ত জারণ প্রধানত ট্রানজিশন মেটাল আয়ন, বিশেষ করে ফেরিক আয়রনের কারণে ঘটে, যা পানিতে অপদ্রব্য হিসেবে থাকে। H2S-এর জারণের ফলে পলিসালফাইড (সমযোজী বন্ধন দ্বারা যুক্ত সালফার পরমাণু) গঠিত হয়। এর জারণ এড়ানোর জন্য, H2S যুক্ত দ্রবণ অক্সিজেনমুক্ত দ্রাবকে প্রস্তুত করা হয়44,45 এবং তারপর অক্সিজেনমুক্তকরণ নিশ্চিত করতে 20-30 মিনিটের জন্য আর্গন বা নাইট্রোজেন দিয়ে পার্জ করা হয়।11,12,37,44,45,46 ডাইইথিলিনট্রাইঅ্যামাইনপেন্টাঅ্যাসিটিক অ্যাসিড (DTPA) একটি মেটাল চিলেটর (10–4 M) যা বায়বীয় দ্রবণে HS- এর স্বতঃজারণ প্রতিরোধ করে। DTPA-এর অনুপস্থিতিতে, 25°C তাপমাত্রায় প্রায় 3 ঘন্টায় HS- এর স্বতঃজারণের হার প্রায় 50% হয়37,47। অধিকন্তু, যেহেতু 1e-সালফাইডের জারণ অতিবেগুনি রশ্মি দ্বারা অনুঘটকিত হয়, তাই দ্রবণটি বরফের উপর সংরক্ষণ করা উচিত এবং আলো থেকে সুরক্ষিত রাখা উচিত11।
চিত্র ৫-এ যেমন দেখানো হয়েছে, NaHS পানিতে দ্রবীভূত হলে Na+ এবং HS-6-এ বিয়োজিত হয়; এই বিয়োজন বিক্রিয়ার pK1 দ্বারা নির্ধারিত হয়, যা তাপমাত্রার উপর নির্ভরশীল: pK1 = 3.122 + 1132/T, যেখানে T-এর পরিসর ৫ থেকে ৩০°C এবং এটি কেলভিন (K) ডিগ্রিতে পরিমাপ করা হয়, K = °C + 273.1548। HS- এর pK2 উচ্চ (pK2 = 19), তাই pH < 96.49 হলে, S2- গঠিত হয় না বা খুব অল্প পরিমাণে গঠিত হয়। এর বিপরীতে, HS- একটি ক্ষারক হিসেবে কাজ করে এবং একটি H2O অণু থেকে H+ গ্রহণ করে, এবং H2O একটি অ্যাসিড হিসেবে কাজ করে H2S এবং OH- এ রূপান্তরিত হয়।
NaHS দ্রবণে (৩০ µM) দ্রবীভূত H2S গ্যাসের গঠন। aq, জলীয় দ্রবণ; g, গ্যাস; l, তরল। সমস্ত গণনায় ধরে নেওয়া হয়েছে যে জলের pH = ৭.০ এবং জলের তাপমাত্রা = ২০ °C। BioRender.com দিয়ে তৈরি।
NaHS দ্রবণ যে অস্থিতিশীল, তার প্রমাণ থাকা সত্ত্বেও, বেশ কিছু প্রাণী গবেষণায় পানীয় জলে H2S দাতা যৌগ হিসেবে NaHS দ্রবণ ব্যবহার করা হয়েছে¹⁵,¹⁶,¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹,²²,²³,²⁴,²⁵,²⁶, যেখানে হস্তক্ষেপের সময়কাল ছিল ১ থেকে ২১ সপ্তাহ পর্যন্ত (সারণী ২)। এই গবেষণা চলাকালীন, NaHS দ্রবণটি প্রতি ১২ ঘণ্টা, ১৫, ১৭, ১৮, ২৪, ২৫ ঘণ্টা অথবা ২৪ ঘণ্টা, ১৯, ২০, ২১, ২২, ২৩ ঘণ্টা পর পর পরিবর্তন করা হতো। আমাদের ফলাফলে দেখা গেছে যে, NaHS দ্রবণ থেকে H2S বেরিয়ে যাওয়ার কারণে ইঁদুরগুলো অস্থিতিশীল ঔষধ ঘনত্বের সংস্পর্শে এসেছিল এবং ১২ বা ২৪ ঘণ্টার মধ্যে ইঁদুরের পানীয় জলে NaHS-এর পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে ওঠানামা করেছিল (চিত্র ২ দেখুন)। এই গবেষণাগুলোর মধ্যে দুটিতে বলা হয়েছে যে পানিতে H2S-এর মাত্রা ২৪ ঘণ্টা ধরে স্থিতিশীল ছিল²² অথবা ১২ ঘণ্টায় মাত্র ২-৩% H2S হ্রাস লক্ষ্য করা গেছে¹⁵, কিন্তু তারা এর সমর্থনে কোনো তথ্য বা পরিমাপের বিস্তারিত বিবরণ দেয়নি। দুটি গবেষণায় দেখা গেছে যে পানির বোতলের ছোট ব্যাস H2S-এর বাষ্পীভবন কমাতে পারে¹⁵,¹⁹। তবে, আমাদের ফলাফল দেখিয়েছে যে এটি একটি পানির বোতল থেকে H2S-এর হ্রাসকে ১২-২৪ ঘণ্টার পরিবর্তে মাত্র ২ ঘণ্টা বিলম্বিত করতে পারে। উভয় গবেষণাতেই উল্লেখ করা হয়েছে যে, আমরা ধরে নিয়েছি পানীয় জলে NaHS-এর মাত্রার কোনো পরিবর্তন হয়নি, কারণ আমরা জলের রঙের কোনো পরিবর্তন লক্ষ্য করিনি; সুতরাং, বায়ু দ্বারা H2S-এর জারণ উল্লেখযোগ্য ছিল না¹⁹,²⁰। আশ্চর্যজনকভাবে, এই ব্যক্তিনিষ্ঠ পদ্ধতিটি সময়ের সাথে সাথে NaHS-এর ঘনত্বের পরিবর্তন পরিমাপ না করে, বরং জলে এর স্থিতিশীলতা মূল্যায়ন করে।
NaHS দ্রবণে H2S-এর ক্ষয় pH এবং তাপমাত্রার সাথে সম্পর্কিত। আমাদের গবেষণায় যেমন উল্লেখ করা হয়েছে, জলে NaHS দ্রবীভূত করলে একটি ক্ষারীয় দ্রবণ তৈরি হয়50। যখন NaHS জলে দ্রবীভূত হয়, তখন দ্রবীভূত H2S গ্যাসের গঠন pH মানের উপর নির্ভর করে6। দ্রবণের pH যত কম হয়, H2S গ্যাস অণু হিসাবে উপস্থিত NaHS-এর অনুপাত তত বেশি হয় এবং জলীয় দ্রবণ থেকে তত বেশি সালফাইড ক্ষয় হয়11। এই গবেষণাগুলির কোনোটিতেই NaHS-এর দ্রাবক হিসাবে ব্যবহৃত পানীয় জলের pH উল্লেখ করা হয়নি। WHO-এর সুপারিশ অনুযায়ী, যা বেশিরভাগ দেশ গ্রহণ করেছে, পানীয় জলের pH 6.5–8.55 পরিসরের মধ্যে থাকা উচিত1। এই pH পরিসরে, H2S-এর স্বতঃস্ফূর্ত জারণের হার প্রায় দশগুণ বৃদ্ধি পায়13। এই pH পরিসরে জলে NaHS দ্রবীভূত করলে দ্রবীভূত H2S গ্যাসের ঘনত্ব 1 থেকে 22.5 μM হবে, যা NaHS দ্রবীভূত করার আগে জলের pH নিরীক্ষণের গুরুত্ব তুলে ধরে। অধিকন্তু, উপরোক্ত গবেষণায় উল্লিখিত তাপমাত্রার পরিসর (১৮–২৬ °C) দ্রবণে দ্রবীভূত H2S গ্যাসের ঘনত্বের প্রায় ১০% পরিবর্তন ঘটাবে, যেহেতু তাপমাত্রার পরিবর্তন pK1-কে পরিবর্তন করে, এবং pK1-এর সামান্য পরিবর্তনও দ্রবীভূত H2S গ্যাসের ঘনত্বের উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলতে পারে48। এছাড়াও, কিছু গবেষণার দীর্ঘ সময়কাল (৫ মাস)22, যে সময়ে তাপমাত্রার ব্যাপক পরিবর্তনশীলতা প্রত্যাশিত, তাও এই সমস্যাকে আরও বাড়িয়ে তোলে।
একটি গবেষণা২১ ছাড়া বাকি সব গবেষণায় পানীয় জলে ৩০ μM NaHS দ্রবণ ব্যবহার করা হয়েছে। ব্যবহৃত মাত্রা (অর্থাৎ ৩০ μM) ব্যাখ্যা করতে গিয়ে, কিছু লেখক উল্লেখ করেছেন যে জলীয় দশায় NaHS ঠিক একই ঘনত্বের H2S গ্যাস তৈরি করে এবং H2S-এর শারীরবৃত্তীয় পরিসর হলো ১০ থেকে ১০০ μM, তাই এই মাত্রাটি শারীরবৃত্তীয় পরিসরের মধ্যেই পড়ে১৫,১৬। অন্যরা ব্যাখ্যা করেছেন যে ৩০ μM NaHS প্লাজমার H2S-এর মাত্রা শারীরবৃত্তীয় পরিসরের মধ্যে, অর্থাৎ ৫–৩০০ μM-এর মধ্যে বজায় রাখতে পারে১৯,২০। আমরা জলে NaHS-এর ৩০ μM ঘনত্ব (pH = ৭.০, T = ২০ °C) বিবেচনা করছি, যা কিছু গবেষণায় H2S-এর প্রভাব অধ্যয়নের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। আমরা গণনা করে দেখতে পারি যে দ্রবীভূত H2S গ্যাসের ঘনত্ব হলো ১৪.৭ μM, যা প্রাথমিক NaHS ঘনত্বের প্রায় ৫০%। এই মানটি একই পরিস্থিতিতে অন্যান্য লেখকদের দ্বারা গণনা করা মানের অনুরূপ১৩,৪৮।
আমাদের গবেষণায়, NaHS প্রয়োগ শরীরের ওজনের কোনো পরিবর্তন ঘটায়নি; এই ফলাফল পুরুষ ইঁদুর²²,²³ এবং পুরুষ র‍্যাট¹⁸-এর উপর করা অন্যান্য গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ; তবে, দুটি গবেষণায় দেখা গেছে যে নেফ্রেক্টোমাইজড র‍্যাট²⁴,²⁶-এর কমে যাওয়া শরীরের ওজন NaSH পুনরুদ্ধার করেছে, যেখানে অন্যান্য গবেষণায় শরীরের ওজনের উপর NaSH প্রয়োগের কোনো প্রভাবের কথা উল্লেখ করা হয়নি¹⁵,¹⁶,¹⁷,¹⁹,²⁰,²¹,²⁵। অধিকন্তু, আমাদের গবেষণায়, NaSH প্রয়োগ সিরাম ইউরিয়া এবং ক্রিয়েটিন ক্রোমিয়ামের মাত্রাকে প্রভাবিত করেনি, যা অন্য একটি প্রতিবেদনের²⁵ ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।
গবেষণায় দেখা গেছে যে, ২ সপ্তাহ ধরে পানীয় জলে NaHS যোগ করা পুরুষ এবং মহিলা ইঁদুরের মোট সিরাম সালফাইড ঘনত্বের উপর কোনো প্রভাব ফেলেনি। এই ফলাফল সেন এট আল. (16)-এর ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ: পানীয় জলে 30 μM NaHS দিয়ে ৮ সপ্তাহ চিকিৎসার ফলে নিয়ন্ত্রণাধীন ইঁদুরের প্লাজমা সালফাইড স্তরের উপর কোনো প্রভাব পড়েনি; তবে, তারা রিপোর্ট করেছেন যে এই হস্তক্ষেপ নেফ্রেক্টোমাইজড ইঁদুরের প্লাজমায় হ্রাসপ্রাপ্ত H2S স্তর পুনরুদ্ধার করেছে। লি এট আল. (22) আরও রিপোর্ট করেছেন যে, ৫ মাস ধরে পানীয় জলে 30 μM NaHS দিয়ে চিকিৎসার ফলে বয়স্ক ইঁদুরের প্লাজমা মুক্ত সালফাইড স্তর প্রায় 26% বৃদ্ধি পেয়েছে। অন্যান্য গবেষণায় পানীয় জলে NaHS যোগ করার পরে সঞ্চালনশীল সালফাইডের কোনো পরিবর্তন রিপোর্ট করা হয়নি।
সাতটি গবেষণায় সিগমা NaHS ব্যবহারের কথা বলা হয়েছে¹⁵,¹⁶,¹⁹,²⁰,²¹,²²,²³ কিন্তু এতে থাকা জলীয় বাষ্প সম্পর্কে বিস্তারিত তথ্য দেওয়া হয়নি, এবং পাঁচটি গবেষণায় তাদের প্রস্তুতি পদ্ধতিতে ব্যবহৃত NaHS-এর উৎসের উল্লেখ করা হয়নি¹⁷,¹⁸,²⁴,²⁵,²⁶। NaHS একটি জলীয় অণু এবং এর জলীয় বাষ্পের পরিমাণ ভিন্ন হতে পারে, যা একটি নির্দিষ্ট মোলারিটির দ্রবণ প্রস্তুত করার জন্য প্রয়োজনীয় NaHS-এর পরিমাণকে প্রভাবিত করে। উদাহরণস্বরূপ, আমাদের গবেষণায় NaHS-এর পরিমাণ ছিল NaHS•1.3 H₂O। সুতরাং, এই গবেষণাগুলিতে NaHS-এর প্রকৃত ঘনত্ব উল্লিখিত ঘনত্বের চেয়ে কম হতে পারে।
“কীভাবে এমন একটি স্বল্পস্থায়ী যৌগের এত দীর্ঘস্থায়ী প্রভাব থাকতে পারে?” ইঁদুরের কোলাইটিসের উপর NaHS-এর প্রভাব মূল্যায়ন করার সময় পোজগে ও তার সহকর্মীরা²¹ এই প্রশ্নটি করেছিলেন। তারা আশা করেন যে ভবিষ্যতের গবেষণা এই প্রশ্নের উত্তর দিতে সক্ষম হবে এবং অনুমান করেন যে NaHS দ্রবণে H₂S এবং ডাইসালফাইডের পাশাপাশি আরও স্থিতিশীল পলিসালফাইড থাকতে পারে, যা NaHS-এর প্রভাবকে মধ্যস্থতা করে²¹। আরেকটি সম্ভাবনা হলো, দ্রবণে অবশিষ্ট থাকা NaHS-এর খুব কম ঘনত্বও উপকারী প্রভাব ফেলতে পারে। প্রকৃতপক্ষে, ওলসন ও তার সহকর্মীরা প্রমাণ দিয়েছেন যে রক্তে H₂S-এর মাইক্রোমোলার মাত্রা শারীরবৃত্তীয় নয় এবং এটি ন্যানোমোলার পরিসরে থাকা উচিত বা একেবারেই অনুপস্থিত থাকা উচিত¹³। H₂S প্রোটিন সালফেশনের মাধ্যমে কাজ করতে পারে, যা একটি পরিবর্তনযোগ্য পোস্ট-ট্রান্সলেশনাল মডিফিকেশন এবং এটি অনেক প্রোটিনের কার্যকারিতা, স্থিতিশীলতা এবং অবস্থানকে প্রভাবিত করে⁵²,⁵³,⁵⁴। প্রকৃতপক্ষে, শারীরবৃত্তীয় পরিস্থিতিতে, যকৃতের অনেক প্রোটিনের প্রায় ১০% থেকে ২৫% সালফাইলেটেড হয়⁵³। উভয় গবেষণাই NaHS-এর দ্রুত ধ্বংসের কথা স্বীকার করে¹⁹,²³ কিন্তু আশ্চর্যজনকভাবে উল্লেখ করে যে, “আমরা প্রতিদিন প্রতিস্থাপনের মাধ্যমে পানীয় জলে NaHS-এর ঘনত্ব নিয়ন্ত্রণ করেছি।”²³ একটি গবেষণায় ভুলবশত বলা হয়েছে যে, “NaHS একটি আদর্শ H₂S দাতা এবং এটি সাধারণত চিকিৎসাক্ষেত্রে H₂S-কে প্রতিস্থাপন করতে ব্যবহৃত হয়।”¹⁸
উপরের আলোচনা থেকে দেখা যায় যে, NaHS বাষ্পীভবন, জারণ এবং আলোক-বিশ্লেষণের মাধ্যমে দ্রবণ থেকে অপসারিত হয়, এবং তাই দ্রবণ থেকে H2S-এর অপসারণ কমানোর জন্য কিছু পরামর্শ দেওয়া হলো। প্রথমত, H2S-এর বাষ্পীভবন গ্যাস-তরল আন্তঃপৃষ্ঠ¹³ এবং দ্রবণের pH¹¹-এর উপর নির্ভর করে; অতএব, বাষ্পীভবনজনিত ক্ষতি কমানোর জন্য, পূর্বে বর্ণিত¹⁵,¹⁹ অনুযায়ী জলের বোতলের মুখ যথাসম্ভব ছোট করা যেতে পারে, এবং জলের pH একটি গ্রহণযোগ্য ঊর্ধ্বসীমায় (যেমন, ৬.৫–৮.৫৫¹) সামঞ্জস্য করা যেতে পারে। দ্বিতীয়ত, পানীয় জলে অক্সিজেন এবং অবস্থান্তর ধাতব আয়নের উপস্থিতির প্রভাবে H2S-এর স্বতঃস্ফূর্ত জারণ ঘটে¹³, তাই আর্গন বা নাইট্রোজেন⁴⁴,⁴⁵ দ্বারা পানীয় জলের অক্সিজেন অপসারণ এবং ধাতব চিলেটর³⁷,⁴⁷-এর ব্যবহার সালফাইডের জারণ কমাতে পারে। তৃতীয়ত, H2S-এর আলোক-বিয়োজন রোধ করতে, জলের বোতল অ্যালুমিনিয়াম ফয়েল দিয়ে মোড়ানো যেতে পারে; এই পদ্ধতিটি স্ট্রেপ্টোজোটোসিন৫৫-এর মতো আলোক-সংবেদনশীল পদার্থের ক্ষেত্রেও প্রযোজ্য। পরিশেষে, অজৈব সালফাইড লবণ (NaHS, Na2S, এবং CaS) পূর্বে উল্লিখিত৫৬,৫৭,৫৮ অনুযায়ী পানীয় জলে দ্রবীভূত করার পরিবর্তে গ্যাভেজের মাধ্যমে প্রয়োগ করা যেতে পারে; গবেষণায় দেখা গেছে যে ইঁদুরের উপর গ্যাভেজের মাধ্যমে প্রয়োগ করা তেজস্ক্রিয় সোডিয়াম সালফাইড ভালোভাবে শোষিত হয় এবং প্রায় সমস্ত কলায় ছড়িয়ে পড়ে৫৯। আজ পর্যন্ত, বেশিরভাগ গবেষণায় অজৈব সালফাইড লবণ ইন্ট্রাপেরিটোনিয়ালি প্রয়োগ করা হয়েছে; তবে, ক্লিনিকাল সেটিংসে এই পথটি খুব কমই ব্যবহৃত হয়৬০। অন্যদিকে, মানুষের ক্ষেত্রে মৌখিক পথটিই সবচেয়ে সাধারণ এবং পছন্দের প্রয়োগ পথ৬১। অতএব, আমরা ইঁদুরজাতীয় প্রাণীর উপর H2S ডোনারের প্রভাব ওরাল গ্যাভেজের মাধ্যমে মূল্যায়ন করার সুপারিশ করছি।
একটি সীমাবদ্ধতা হলো, আমরা এমবি (MB) পদ্ধতি ব্যবহার করে জলীয় দ্রবণ এবং সিরামে সালফাইড পরিমাপ করেছি। সালফাইড পরিমাপের পদ্ধতিগুলোর মধ্যে রয়েছে আয়োডিন টাইট্রেশন, স্পেকট্রোফোটোমেট্রি, ইলেক্ট্রোকেমিক্যাল পদ্ধতি (পটেনশিওমেট্রি, অ্যাম্পেরোমেট্রি, কুলোমেট্রিক পদ্ধতি এবং অ্যাম্পেরোমেট্রিক পদ্ধতি) এবং ক্রোমাটোগ্রাফি (গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি এবং হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি), যার মধ্যে সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত পদ্ধতি হলো এমবি স্পেকট্রোফোটোমেট্রিক পদ্ধতি৬২। জৈবিক নমুনায় H2S পরিমাপের জন্য এমবি পদ্ধতির একটি সীমাবদ্ধতা হলো, এটি সমস্ত সালফার-যুক্ত যৌগ পরিমাপ করে কিন্তু মুক্ত H2S পরিমাপ করে না৬৩, কারণ এটি অম্লীয় অবস্থায় করা হয়, যার ফলে জৈবিক উৎস থেকে সালফার নিষ্কাশিত হয়৬৪। তবে, আমেরিকান পাবলিক হেলথ অ্যাসোসিয়েশন অনুসারে, জলে সালফাইড পরিমাপের জন্য এমবি হলো আদর্শ পদ্ধতি৬৫। সুতরাং, এই সীমাবদ্ধতা NaHS যুক্ত দ্রবণের অস্থিতিশীলতা সম্পর্কিত আমাদের মূল ফলাফলকে প্রভাবিত করে না। অধিকন্তু, আমাদের গবেষণায়, NaHS যুক্ত জল এবং সিরামের নমুনায় সালফাইড পরিমাপের পুনরুদ্ধার ছিল যথাক্রমে ৯১% এবং ৯৩%। এই মানগুলি পূর্বে রিপোর্ট করা পরিসীমা (৭৭-৯২)৬৬-এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, যা গ্রহণযোগ্য বিশ্লেষণাত্মক নির্ভুলতা৪২ নির্দেশ করে। এটি উল্লেখযোগ্য যে, আমরা ন্যাশনাল ইনস্টিটিউটস অফ হেলথ (NIH)-এর নির্দেশিকা অনুসারে পুরুষ ও মহিলা উভয় ইঁদুর ব্যবহার করেছি, যাতে প্রাক-ক্লিনিক্যাল গবেষণায় শুধুমাত্র পুরুষ প্রাণীর উপর অতিরিক্ত নির্ভরতা এড়ানো যায়৬৭ এবং যখনই সম্ভব পুরুষ ও মহিলা উভয় ইঁদুর অন্তর্ভুক্ত করা যায়৬৮। এই বিষয়টি অন্যরাও৬৯,৭০,৭১ উল্লেখ করেছেন।
উপসংহারে, এই গবেষণার ফলাফল ইঙ্গিত করে যে, পানীয় জল থেকে প্রস্তুত NaHS দ্রবণ তার অস্থিতিশীলতার কারণে H2S উৎপাদনে ব্যবহার করা যায় না। প্রয়োগের এই পদ্ধতি প্রাণীদেরকে অস্থিতিশীল এবং প্রত্যাশিত মাত্রার চেয়ে কম NaHS-এর সংস্পর্শে আনবে; সুতরাং, এই ফলাফল মানুষের ক্ষেত্রে প্রযোজ্য নাও হতে পারে।
বর্তমান গবেষণায় ব্যবহৃত এবং/অথবা বিশ্লেষিত ডেটাসেটগুলো যুক্তিসঙ্গত অনুরোধের ভিত্তিতে সংশ্লিষ্ট লেখকের কাছ থেকে পাওয়া যাবে।
সাজাবো, কে. হাইড্রোজেন সালফাইড (H2S) গবেষণার সময়রেখা: পরিবেশগত বিষ থেকে জৈবিক মধ্যস্থতাকারী। বায়োকেমিস্ট্রি অ্যান্ড ফার্মাকোলজি ১৪৯, ৫–১৯। https://doi.org/10.1016/j.bcp.2017.09.010 (২০১৮)।
আবে, কে. এবং কিমুরা, এইচ. অন্তঃসৃষ্ট নিউরোমডুলেটর হিসেবে হাইড্রোজেন সালফাইডের সম্ভাব্য ভূমিকা। জার্নাল অফ নিউরোসায়েন্স, ১৬, ১০৬৬–১০৭১। https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.16-03-01066.1996 (১৯৯৬)।
চিরিনো, জি., সাজাবো, সি. এবং পাপাপেট্রোপোলোস, এ. স্তন্যপায়ী কোষ, কলা এবং অঙ্গে হাইড্রোজেন সালফাইডের শারীরবৃত্তীয় ভূমিকা। রিভিউস ইন ফিজিওলজি অ্যান্ড মলিকুলার বায়োলজি ১০৩, ৩১–২৭৬। https://doi.org/10.1152/physrev.00028.2021 (২০২৩)।
ডিলন, কেএম, ক্যারাজোন, আরজে, ম্যাটসন, জেবি, এবং কাশফি, কে। নাইট্রিক অক্সাইড এবং হাইড্রোজেন সালফাইডের জন্য কোষীয় সরবরাহ ব্যবস্থার ক্রমবর্ধমান সম্ভাবনা: ব্যক্তিগতকৃত চিকিৎসার এক নতুন যুগ। বায়োকেমিস্ট্রি অ্যান্ড ফার্মাকোলজি ১৭৬, ১১৩৯৩১। https://doi.org/10.1016/j.bcp.2020.113931 (২০২০)।
সান, এক্স., প্রমুখ। একটি ধীর-নিঃসরণকারী হাইড্রোজেন সালফাইড দাতার দীর্ঘমেয়াদী প্রয়োগ মায়োকার্ডিয়াল ইস্কেমিয়া/রিপারফিউশন ইনজুরি প্রতিরোধ করতে পারে। সায়েন্টিফিক রিপোর্টস ৭, ৩৫৪১। https://doi.org/10.1038/s41598-017-03941-0 (২০১৭)।
সিটডিকোভা, জিএফ, ফুকস, আর., কেইনজ, ডব্লিউ., ওয়েগার, টিএম এবং হারমান, এ. বিকে চ্যানেল ফসফোরাইলেশন হাইড্রোজেন সালফাইড (H2S) সংবেদনশীলতা নিয়ন্ত্রণ করে। ফ্রন্টিয়ার্স ইন ফিজিওলজি ৫, ৪৩১। https://doi.org/10.3389/fphys.2014.00431 (২০১৪)।
সিটডিকোভা, জিএফ, উইগার, টিএম এবং হারমান, এ. হাইড্রোজেন সালফাইড ইঁদুরের পিটুইটারি টিউমার কোষে ক্যালসিয়াম-সক্রিয় পটাশিয়াম (বিকে) চ্যানেলের কার্যকলাপ বৃদ্ধি করে। আর্কিট. ফ্লুগার্স. 459, 389–397। https://doi.org/10.1007/s00424-009-0737-0 (2010)।
জেডি, এস., প্রমুখ। টাইপ ২ ডায়াবেটিক ইঁদুরের মায়োকার্ডিয়াল ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন ইনজুরির বিরুদ্ধে নাইট্রাইটের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব হাইড্রোজেন সালফাইড বৃদ্ধি করে। নাইট্রিক অক্সাইড ১২৪, ১৫–২৩। https://doi.org/10.1016/j.niox.2022.04.004 (২০২২)।
করভিনো, এ., প্রমুখ। H2S দাতা রসায়নের প্রবণতা এবং হৃদরোগের উপর এর প্রভাব। অ্যান্টিঅক্সিডেন্টস ১০, ৪২৯। https://doi.org/10.3390/antiox10030429 (২০২১)।
ডি লিওন, ইআর, স্টয়, জিএফ, এবং ওলসন, কেআর (২০১২)। জৈবিক পরীক্ষায় হাইড্রোজেন সালফাইডের নিষ্ক্রিয় ক্ষয়। অ্যানালিটিক্যাল বায়োকেমিস্ট্রি ৪২১, ২০৩–২০৭। https://doi.org/10.1016/j.ab.2011.10.016 (২০১২)।
নাগি, পি., প্রমুখ। শারীরবৃত্তীয় নমুনায় হাইড্রোজেন সালফাইড পরিমাপের রাসায়নিক দিকসমূহ। বায়োকেমিকা এট বায়োফিজিক্যাল অ্যাক্টা ১৮৪০, ৮৭৬–৮৯১। https://doi.org/10.1016/j.bbagen.2013.05.037 (২০১৪)।
ক্লেইন, এলএল.ডি.। প্রাকৃতিক জলে হাইড্রোজেন সালফাইডের বর্ণালিবীক্ষণিক নির্ণয়। লিম্নল. ওশানোগ্রাফি. ১৪, ৪৫৪–৪৫৮। https://doi.org/10.4319/lo.1969.14.3.0454 (১৯৬৯)।
ওলসন, কেআর (২০১২)। হাইড্রোজেন সালফাইডের রসায়ন ও জীববিজ্ঞানে ব্যবহারিক প্রশিক্ষণ। “অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট।” রেডক্স সিগন্যালিং। ১৭, ৩২–৪৪। https://doi.org/10.1089/ars.2011.4401 (২০১২)।