আপনার ব্রাউজারে জাভাস্ক্রিপ্ট বর্তমানে অক্ষম করা আছে। জাভাস্ক্রিপ্ট অক্ষম করা থাকলে এই ওয়েবসাইটের কিছু বৈশিষ্ট্য কাজ করবে না।
আপনার নির্দিষ্ট বিবরণ এবং আগ্রহের নির্দিষ্ট ওষুধ দিয়ে নিবন্ধন করুন এবং আমরা আপনার প্রদত্ত তথ্য আমাদের বিস্তৃত ডাটাবেসের নিবন্ধগুলির সাথে মিলিয়ে দেব এবং অবিলম্বে আপনাকে একটি পিডিএফ কপি ইমেল করব।
ব্যান-ল্যান-জেন গ্রানুলগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা সংশোধন করে এবং অন্ত্রের SCFA ডেরিভড-GLP-1 উৎপাদন পুনরুদ্ধার করে ইঁদুরের ডেক্সট্রান সোডিয়াম সালফেট-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসকে হ্রাস করে
জিয়াও পেং,১-৩,*লি শি,৪,*ঝেং লিন,৩,৫ ডুয়ান লিফাং,১ গাও ঝেংজিয়ান,২,৫ দিহু,১ লি জি,৬ লি জিয়াওফেং,৬ শেন জিয়াংচুন,৫ জিয়াও হাইতাও২১পিকিং বিশ্ববিদ্যালয় শেনজেন হাসপাতাল ফার্মেসি বিভাগ, শেনজেন, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন;২শেনজেন বিশ্ববিদ্যালয় স্বাস্থ্য বিজ্ঞান কেন্দ্র স্কুল অফ ফার্মেসি, শেনজেন, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন;৩গুইঝো মেডিকেল বিশ্ববিদ্যালয় ইঞ্জিনিয়ারিং টেকনোলজি রিসার্চ সেন্টার অফ এথনিক মেডিসিন অ্যান্ড ট্র্যাডিশনাল চাইনিজ মেডিসিন ডেভেলপমেন্ট অ্যান্ড অ্যাপ্লিকেশন মিনিস্ট্রি অফ এডুকেশন, গুইঝো প্রাদেশিক কী ল্যাবরেটরি অফ ফার্মেসি, গুইঝো মেডিকেল বিশ্ববিদ্যালয়, গুইইয়াং, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন;৪ গ্যাস্ট্রোএন্টারোলজি বিভাগ, পিকিং বিশ্ববিদ্যালয় শেনজেন হাসপাতাল, শেনজেন, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন;৫ ফার্মেসি স্কুল, গুইঝো মেডিকেল বিশ্ববিদ্যালয়, মেডিসিনাল প্ল্যান্ট ফাংশন অ্যান্ড অ্যাপ্লিকেশনের স্টেট কী ল্যাবরেটরি, গুইইয়াং; ৬টি ল্যাবরেটরি মেডিসিন বিভাগ, পিকিং ইউনিভার্সিটি শেনজেন হাসপাতাল, শেনজেন, চীন [email protected] শেন জিয়াংচুন, স্কুল অফ ফার্মেসি, গুইঝো মেডিকেল বিশ্ববিদ্যালয়, গুইঝো, গণপ্রজাতন্ত্রী চীন, ৫৫০০০৪, ইমেল [email protected] উদ্দেশ্য: GLP-১-ভিত্তিক থেরাপি প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগের জন্য একটি নতুন চিকিৎসা বিকল্প।ব্যান-ল্যান-জেন (BLG) গ্রানুলগুলি একটি পরিচিত অ্যান্টিভাইরাল TCM ফর্মুলেশন যা বিভিন্ন প্রদাহজনক অবস্থার চিকিৎসায় সম্ভাব্য প্রদাহ-বিরোধী কার্যকলাপ প্রদর্শন করে।যাইহোক, কোলাইটিসের উপর এর প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব এবং এর কর্মের প্রক্রিয়া এখনও অস্পষ্ট।পদ্ধতি: ইঁদুরের মধ্যে ডেক্সট্রান সোডিয়াম সালফেট (DSS)-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিস স্থাপন করা।BLG-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব মূল্যায়ন করার জন্য রোগের কার্যকলাপ সূচক, আঘাতের হিস্টোলজিক্যাল মার্কার এবং প্রোইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন স্তর পরীক্ষা করা হয়েছিল।অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের উপর BLG-এর প্রভাবগুলি সিরাম GLP-1 স্তর এবং কোলনিক Gcg, GPR41, এবং GRP43 প্রকাশ, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা রচনা, মল SCFA দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। প্রাথমিক মাউস কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ SCFA-প্রাপ্ত GLP-1 উৎপাদন থেকে GLP-1 এর মাত্রা এবং মুক্তি। ফলাফল: BLG চিকিৎসা শরীরের ওজন হ্রাস, DAI, কোলন শর্টনিং, কোলন টিস্যুর ক্ষতি এবং কোলন টিস্যুতে TNF-α, IL-1β, এবং IL-6 এর প্রোইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। এছাড়াও, BLG চিকিৎসা কোলাইটিস ইঁদুরের কোলনিক Gcg, GPR41 এবং GRP43 এক্সপ্রেশন এবং সিরাম GLP-1 এর মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে পুনরুদ্ধার করতে পারে, এবং Akkermansia এবং Prevotellaceae_UCG-001 এর মতো SCFA-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধি করে এবং Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas এবং Oscillibacter এর মতো ব্যাকটেরিয়ার প্রাচুর্য হ্রাস করে। এছাড়াও, BLG চিকিৎসা কোলাইটিস ইঁদুরের মলে SCFA এর মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করতে পারে। একই সময়ে, ইন ভিট্রো পরীক্ষায় আরও দেখা গেছে যে BLG-চিকিৎসা করা ইঁদুরের মল নির্যাস প্রাথমিক ক্ষুদ্র মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষগুলিকে GLP-1 নিঃসরণে ব্যাপকভাবে উদ্দীপিত করতে পারে। উপসংহার: এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে BLG-এর একটি অ্যান্টি-কোলাইটিস প্রভাব রয়েছে। BLG-কে থেরাপি হিসাবে বিকশিত করার সম্ভাবনা রয়েছে, অন্তত আংশিকভাবে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে সংশোধন করে এবং অন্ত্রের SCFA-প্রাপ্ত GLP-1 উৎপাদন পুনরুদ্ধার করে দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসের জন্য প্রতিশ্রুতিশীল ওষুধ। কীওয়ার্ড: কোলাইটিস, ব্যান-ল্যান-জেন গ্রানুলস, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা, শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিড, GLP-1
আলসারেটিভ কোলাইটিস (UC) হল কোলন এবং মলদ্বারের একটি দীর্ঘমেয়াদী প্রদাহজনিত রোগ যা বারবার ডায়রিয়া, পেটে ব্যথা, ওজন হ্রাস এবং মিউকোপিউরুলেন্ট রক্তাক্ত মল দ্বারা চিহ্নিত করা হয়।1 সম্প্রতি, পশ্চিমা জীবনধারার ক্রমবর্ধমান জনপ্রিয়তার সাথে সাথে চীন সহ পূর্বে কম-প্রবণ দেশগুলিতে UC-এর প্রকোপ বৃদ্ধি পাচ্ছে।2 এই বৃদ্ধি জনস্বাস্থ্যের জন্য বড় সমস্যা তৈরি করে এবং রোগীদের কাজ করার ক্ষমতা এবং জীবনযাত্রার মানের উপর গুরুতর প্রভাব ফেলে।উল্লেখযোগ্যভাবে, UC-এর রোগজীবাণু মূলত অস্পষ্ট রয়ে গেছে, তবে এটি সাধারণত গৃহীত হয় যে জেনেটিক্স, পরিবেশগত কারণ, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং রোগ প্রতিরোধ ব্যবস্থা সবই UC-এর বিকাশে অবদান রাখে।3 এখনও, UC-এর কোনও প্রতিকার নেই এবং চিকিৎসার লক্ষ্য হল ক্লিনিক্যালি ক্লিনিক্যালি লক্ষণগুলি নিয়ন্ত্রণ করা, ক্ষমা প্ররোচিত করা এবং বজায় রাখা, মিউকোসাল নিরাময়কে উৎসাহিত করা এবং পুনরাবৃত্তি হ্রাস করা।ধ্রুপদী চিকিৎসার মধ্যে রয়েছে অ্যামিনোসালিসিলেট, কর্টিকোস্টেরয়েড, ইমিউনোসপ্রেসেন্ট এবং জৈবিক।যাইহোক, এই ওষুধগুলি তাদের বিভিন্ন পার্শ্বপ্রতিক্রিয়ার কারণে কাঙ্ক্ষিত প্রভাব অর্জন করতে পারে না।4 সম্প্রতি, অনেক কেস স্টাডিতে দেখা গেছে যে ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধ (TCM) প্রচুর সম্ভাবনা দেখিয়েছে কম বিষাক্ততার সাথে UC উপশম করতে সাহায্য করে, যা ইঙ্গিত দেয় যে নতুন TCM থেরাপির বিকাশ UC.5-7 এর জন্য একটি প্রতিশ্রুতিশীল চিকিৎসা কৌশল।
ব্যানলানজেন গ্রানুলস (BLG) হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধ যা ব্যানলানজেন মূলের জলীয় নির্যাস থেকে তৈরি।8 এর অ্যান্টিভাইরাল কার্যকারিতা ছাড়াও, BLG বিভিন্ন প্রদাহজনক অবস্থার চিকিৎসায় সম্ভাব্য প্রদাহ-বিরোধী কার্যকলাপ প্রদর্শন করে।9,10 এছাড়াও, গ্লুকোসিনোলেট (R,S-goitrin, progoitrin, epiprorubin এবং glucoside) কে Radix isatidis এর জলীয় নির্যাস এবং নিউক্লিওসাইড (hypoxanthine, adenosine, uridine এবং guanosine) এবং নীল এবং ইন্ডিরুবিনের মতো নীল ক্ষারক থেকে আলাদা করে সনাক্ত করা হয়েছে।11,12 পূর্ববর্তী গবেষণায় ভালভাবে নথিভুক্ত করা হয়েছে যে অ্যাডেনোসিন, ইউরিডিন এবং ইন্ডিরুবিন যৌগগুলি কোলাইটিসের বিভিন্ন প্রাণী মডেলে শক্তিশালী অ্যান্টি-কোলাইটিস প্রভাব প্রদর্শন করে।13-17 তবে, কোলাইটিসে BLG এর কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য কোনও প্রমাণ-ভিত্তিক গবেষণা পরিচালিত হয়নি। বর্তমান গবেষণায়, আমরা ডেক্সট্রান সোডিয়াম সালফেট (DSS)-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসের উপর BLG এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব তদন্ত করেছি। C57BL/6 ইঁদুরের উপর করা একটি গবেষণায় দেখা গেছে যে BLG এর মৌখিক প্রয়োগ ইঁদুরের প্রদাহে DSS-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলনকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, এর নিয়ন্ত্রক প্রক্রিয়াগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার মড্যুলেশন এবং অন্ত্র থেকে প্রাপ্ত গ্লুকাগন-সদৃশ পেপটাইড-1 (GLP-1) উৎপাদন পুনরুদ্ধারের সাথে সম্পর্কিত।
BLG গ্রানুল (চিনিমুক্ত, NMPA-অনুমোদিত Z11020357; বেইজিং টংরেন্টাং টেকনোলজি ডেভেলপমেন্ট কোং, লিমিটেড, বেইজিং, চীন; ব্যাচ নম্বর: 20110966) ফার্মেসি থেকে কেনা হয়েছিল। DSS (আণবিক ওজন: 36,000–50,000 ডাল্টন) MP বায়োলজিক্যালস (সান্তা আনা, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে কেনা হয়েছিল। সালফাসালাজিন (SASP) (≥ 98% বিশুদ্ধতা), হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন সিগমা-অ্যালড্রিচ (সেন্ট লুইস, MO, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে কেনা হয়েছিল। মাউস TNF-α, IL-1β এবং IL-6 লুমিনেক্স এলিসা অ্যাসে কিটগুলি R&D সিস্টেম (মিনিয়াপলিস, MN, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে কেনা হয়েছিল। অ্যাসিটিক অ্যাসিড, প্রোপিওনিক অ্যাসিড এবং বিউটিরিক অ্যাসিড আলাদিন ইন্ডাস্ট্রিজ (সাংহাই, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। 2-ইথাইলবিউটিরিক অ্যাসিড Merck KGaA (ডার্মস্ট্যাড, জার্মানি) থেকে কেনা হয়েছিল।
৬-৮ সপ্তাহ বয়সী পুরুষ C57BL/6 ইঁদুর (শরীরের ওজন ১৮-২২ গ্রাম) বেইজিং ওয়েটাহে ল্যাবরেটরি অ্যানিমেল টেকনোলজি কোং লিমিটেড (বেইজিং, চীন) থেকে কিনে নেওয়া হয়েছিল এবং ২২ ± ২ °C তাপমাত্রার পরিবেশে ১২ ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্রের সাথে রাখা হয়েছিল। নতুন পরিবেশের সাথে খাপ খাইয়ে নেওয়ার জন্য ইঁদুরদের এক সপ্তাহের জন্য বিনামূল্যে পানীয় জলের অ্যাক্সেস সহ একটি স্ট্যান্ডার্ড ইঁদুরের খাবার খাওয়ানো হয়েছিল। এরপর ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে চারটি দলে ভাগ করা হয়েছিল: নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ, DSS মডেল গ্রুপ, SASP-চিকিৎসা করা গ্রুপ (২০০ মিলিগ্রাম/কেজি, মৌখিক) এবং BLG-চিকিৎসা করা গ্রুপ (১ গ্রাম/কেজি, মৌখিক)। চিত্র ১এ-তে দেখানো হয়েছে, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা অনুসারে, পরীক্ষামূলক দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিস ইঁদুরগুলিতে ৫ দিনের জন্য ১.৮% DSS এর তিনটি চক্র দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল, তারপরে ৭ দিনের জন্য পাতিত জল দ্বারা, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা অনুসারে। ১৮ SASP এবং BLG চিকিত্সা করা গ্রুপের ইঁদুরগুলিকে যথাক্রমে SASP এবং BLG দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, প্রতিদিন ০ দিন থেকে শুরু করে। অনুসারে প্রাথমিক পরীক্ষায়, BLG এর ডোজ 1 গ্রাম/কেজি নির্ধারণ করা হয়েছিল। এদিকে, সাহিত্য অনুসারে SASP এর ডোজ 200 মিলিগ্রাম/কেজি নির্ধারণ করা হয়েছিল। 4 নিয়ন্ত্রণ এবং DSS মডেল গ্রুপগুলি পুরো পরীক্ষা জুড়ে একই পরিমাণ জল পেয়েছে।
চিত্র ১: BLG ইঁদুরের মধ্যে DSS-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসকে উন্নত করে। (A) দীর্ঘস্থায়ী পুনরাবৃত্ত কোলাইটিস এবং চিকিৎসার পরীক্ষামূলক নকশা, (B) শরীরের ওজন পরিবর্তন, (C) রোগের কার্যকলাপ সূচক (DAI) স্কোর, (D) কোলনের দৈর্ঘ্য, (E) কোলনের প্রতিনিধিত্বমূলক চিত্র, (F) H&E স্টেনিং কোলন (বিবর্ধন, ×100) এবং (G) হিস্টোলজিক্যাল স্কোর। ডেটা গড় ± SEM (n = 6) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে।##p < 0.01 বা ###p < 0.001 বনাম নিয়ন্ত্রণ (কন) গ্রুপ; *p < 0.05 বা **p < 0.01 বা ***p < 0.001 বনাম DSS গ্রুপ।
শরীরের ওজন, মলের ধারাবাহিকতা এবং মলদ্বার থেকে রক্তপাত প্রতিদিন রেকর্ড করা হত। পূর্বে বর্ণিত শরীরের ওজন, মলের ধারাবাহিকতা এবং মলদ্বার থেকে রক্তপাতের স্কোর একত্রিত করে রোগ কার্যকলাপ সূচক (DAI) নির্ধারণ করা হয়েছিল।19 পরীক্ষার শেষে, সমস্ত ইঁদুরকে euthanized করা হয়েছিল এবং আরও পরীক্ষার জন্য রক্ত, মল এবং কোলন সংগ্রহ করা হয়েছিল।
কোলন টিস্যু ফরমালিন-স্থির করা হয়েছিল এবং প্যারাফিনে এমবেড করা হয়েছিল। ৫-মাইক্রন অংশ তৈরি করা হয়েছিল এবং হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন (H&E) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল, তারপর অন্ধ করে দেওয়া হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে স্কোর করা হয়েছিল।19
কোলন টিস্যুর মোট RNA ট্রিজল রিএজেন্ট (ইনভিট্রোজেন, কার্লসব্যাড, সিএ) দ্বারা নিষ্কাশিত হয়েছিল, তারপরে রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ (টাকারা, কুসাতসু, শিগা, জাপান) দিয়ে সিডিএনএ নিষ্কাশন করা হয়েছিল। SYBR গ্রিন মাস্টার (রোচে, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) এর সাথে একটি রিয়েল-টাইম পিসিআর সিস্টেম ব্যবহার করে পরিমাণগত পিসিআর সঞ্চালিত হয়েছিল। টার্গেট জিন ট্রান্সক্রিপ্টগুলিকে β-অ্যাক্টিনে স্বাভাবিক করা হয়েছিল এবং 2-ΔΔCT পদ্ধতি ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। জিন প্রাইমার সিকোয়েন্সগুলি সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে।
পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রাথমিক মাউস কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ বিচ্ছিন্নকরণ এবং কালচার করা হয়েছিল।20 সংক্ষেপে, 6-8 সপ্তাহ বয়সী ইঁদুরের কোলন প্রথমে সার্ভিকাল ডিসলোকেশন দ্বারা বলি দেওয়ার পরে কেটে ফেলা হয়েছিল, তারপর লম্বালম্বিভাবে খোলা হয়েছিল, হ্যাঙ্কস ব্যালেন্সড সল্ট সলিউশন (HBSS, ক্যালসিয়াম এবং ম্যাগনেসিয়াম ছাড়া) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং 0.5-1 মিমি ছোট ছোট টুকরো করে কাটা হয়েছিল। পরবর্তীতে, টিস্যুগুলিকে 0.4 মিলিগ্রাম/মিলি কোলাজেনেস XI (সিগমা, পুল, যুক্তরাজ্য) দিয়ে বিনামূল্যে DMEM মাধ্যমে হজম করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য 300 xg এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। DMEM মাধ্যমে (10% ভ্রূণ বোভাইন সিরাম, 100 ইউনিট/মিলি পেনিসিলিন এবং 100 µg/মিলি স্ট্রেপ্টোমাইসিনের সাথে পরিপূরক) 37 °C তাপমাত্রায় পুনরায় সাসপেন্ড করুন এবং একটি নাইলন জালের মধ্য দিয়ে যান (ছিদ্রের আকার ~250 µm)। কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষের অ্যালিকোটগুলি কাচের নীচের থালায় স্থাপন করা হয়েছিল এবং অ্যাসিটিক অ্যাসিড, প্রোপিওনিক অ্যাসিড, বিউটিরিক অ্যাসিড, এবং ইঁদুরের মলের নির্যাস ৩৭°C তাপমাত্রায় ২ ঘন্টা, ৫% CO2।
কোলন টিস্যুকে PBS-এর সাথে একজাত করা হয়েছিল, এবং লুমিনেক্স ELISA অ্যাসে কিট (R&D সিস্টেম, মিনিয়াপলিস, MN, USA) ব্যবহার করে কোলন টিস্যুতে সাইটোকাইন IL-6, TNF-α এবং IL-1β-এর মাত্রা সনাক্ত করা হয়েছিল। একইভাবে, প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষের সিরাম এবং কালচার মাধ্যমে GLP-1 স্তরগুলি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে একটি ELISA কিট (বায়োসোয়াম্প, উহান, চীন) দিয়ে নির্ধারণ করা হয়েছিল।
মল থেকে মোট ডিএনএ একটি ডিএনএ এক্সট্রাকশন কিট (তিয়ানজেন, চীন) ব্যবহার করে বের করা হয়েছিল। ডিএনএর গুণমান এবং পরিমাণ যথাক্রমে 260 nm/280 nm এবং 260 nm/230 nm অনুপাতে পরিমাপ করা হয়েছিল। পরবর্তীতে, প্রতিটি এক্সট্রাক্টেড ডিএনএকে একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করে, বিভিন্ন অঞ্চলে 16S rRNA জিনের V3-V4 অঞ্চলগুলিকে প্রশস্ত করার জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার 338F (ACTCCTACGGGAGGCAGCAG) এবং 806R (GGACTACHVGGGTWTCTAAT) ব্যবহার করা হয়েছিল। পিসিআর পণ্যগুলি QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN, জার্মানি) ব্যবহার করে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল, রিয়েল-টাইম PCR দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল এবং IlluminaMiseq PE300 সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্ম (Illumina Inc., CA, USA) ব্যবহার করে সিকোয়েন্স করা হয়েছিল। জৈব তথ্য বিশ্লেষণের জন্য, পূর্বে রিপোর্ট করা প্রোটোকল অনুসরণ করে ডেটা প্রক্রিয়াকরণ করা হয়েছিল। 21,22 সংক্ষেপে, কাঁচা এক্সপ্রেস ফাইল ফিল্টার করতে Cutadapt (V1.9.1) ব্যবহার করুন। OTU গুলিকে ক্লাস্টার করা হয়েছিল UPARSE (সংস্করণ 7.0.1001) যার মিল 97% ছিল, এবং UCHIME কাইমেরিক সিকোয়েন্সগুলি অপসারণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। SILVA রাইবোসোমাল RNA জিন ডাটাবেসের উপর ভিত্তি করে RDP ক্লাসিফায়ার (http://rdp.cme.msu.edu/) ব্যবহার করে সম্প্রদায়ের রচনা বিশ্লেষণ এবং শ্রেণিবিন্যাস করা হয়েছিল।
টাও এবং অন্যান্যদের দ্বারা পূর্বে বর্ণিত শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিডের (অ্যাসিটিক অ্যাসিড, প্রোপিওনিক অ্যাসিড এবং বিউটিরিক অ্যাসিড) মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছিল, কিছু পরিবর্তন সহ।23 সংক্ষেপে, 100 মিলিগ্রাম মল প্রথমে 0.4 মিলি ডিআয়োনাইজড জলে ঝুলিয়ে দেওয়া হয়েছিল, তারপরে 0.1 মিলি 50% সালফিউরিক অ্যাসিড এবং 0.5 মিলি 2-ইথাইলবিউটিরিক অ্যাসিড (অভ্যন্তরীণ মান) দেওয়া হয়েছিল, তারপর একজাত করা হয়েছিল এবং 4°C তাপমাত্রায় উত্তপ্ত করা হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউজ ১২,০০০ আরপিএমে ১৫ মিনিটের জন্য সি তাপমাত্রায়। সুপারনাট্যান্টটি ০.৫ মিলি ইথার দিয়ে বের করা হয়েছিল এবং বিশ্লেষণের জন্য জিসিতে ইনজেক্ট করা হয়েছিল। গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি (জিসি) বিশ্লেষণের জন্য, নমুনাগুলি একটি শিখা আয়নীকরণ সনাক্তকারী (এফআইডি) দিয়ে সজ্জিত জিসি-২০১০ প্লাস গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফ (শিমাদজু, ইনকর্পোরেটেড) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ৩০ মিটার × ০.৫৩ মিমি × ০.৩ μm (ল্যানঝো ঝংকে আনতাই অ্যানালিটিক্যাল টেকনোলজি কোং, লিমিটেড, চীন) একটি জেডকেএটি-৬২৪ কলাম ব্যবহার করে পৃথকীকরণ অর্জন করা হয়েছিল। জিসি সলিউশন সফ্টওয়্যার (শিমাদজু, ইনকর্পোরেটেড) ব্যবহার করে ডেটা সংগ্রহ করা হয়েছিল। বিভাজন অনুপাত ছিল ১০:১, বাহক গ্যাস ছিল নাইট্রোজেন এবং প্রবাহ হার ছিল ৬ মিলি/মিনিট। ইনজেকশনের পরিমাণ ছিল ১ μL। ইনজেক্টর এবং ডিটেক্টরের তাপমাত্রা ছিল ৩০০°C। ওভেনের তাপমাত্রা ১৪০°C এ ১৩.৫ মিনিট ধরে রাখা হয়েছিল, তারপর বৃদ্ধি করা হয়েছিল ১২০°C/মিনিট হারে ২৫০°C; তাপমাত্রা ৫ মিনিট ধরে রাখা হয়েছিল।
ডেটা গড় ± গড়ের মান ত্রুটি (SEM) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। ডেটার তাৎপর্য একমুখী ANOVA দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং তারপরে ডানকানের বহু-পরিসর পরীক্ষা করা হয়েছিল। সমস্ত গণনার জন্য গ্রাফপ্যাড প্রিজম 5.0 সফ্টওয়্যার (গ্রাফপ্যাড সফটওয়্যার ইনকর্পোরেটেড, সান দিয়েগো, CA, USA) ব্যবহার করা হয়েছিল এবং p < 0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।
এটা সুপরিচিত যে UC হল একটি দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিস রোগ যার সাথে তীব্র পেটে ব্যথা, ডায়রিয়া এবং রক্তপাত হয়। অতএব, BLG-এর অ্যান্টি-কোলাইটিস কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য ইঁদুরের DSS-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিস প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল (চিত্র 1A)। নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করলে, DSS মডেল গ্রুপের ইঁদুরের শরীরের ওজন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে এবং DAI বেশি হয়েছে, এবং BLG চিকিৎসার 24 দিন পরে এই পরিবর্তনগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত হয়েছে (চিত্র 1B এবং C)। কোলন শর্টনিং UC-এর একটি গুরুত্বপূর্ণ বৈশিষ্ট্য। চিত্র 1D এবং E-তে দেখানো হয়েছে, DSS প্রাপ্ত ইঁদুরের কোলনের দৈর্ঘ্য উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, কিন্তু BLG চিকিৎসার মাধ্যমে উপশম হয়েছে। পরবর্তীকালে, কোলনের প্রদাহ মূল্যায়ন করার জন্য হিস্টোপ্যাথোলজিকাল বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। H&E দাগযুক্ত ছবি এবং প্যাথলজিকাল স্কোরগুলি দেখায় যে DSS প্রশাসন কোলনিক স্থাপত্যকে উল্লেখযোগ্যভাবে ব্যাহত করেছে এবং এর ফলে ক্রিপ্ট ধ্বংস হয়েছে, যেখানে BLG চিকিৎসা উল্লেখযোগ্যভাবে ক্রিপ্ট ধ্বংস এবং প্যাথলজিকাল স্কোর হ্রাস করেছে (চিত্র 1F এবং G)। উল্লেখযোগ্যভাবে, 1 গ্রাম/কেজি ডোজে BLG-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব তুলনামূলক ছিল ২০০ মিলিগ্রাম/কেজি মাত্রায় SASP। সামগ্রিকভাবে, এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে BLG ইঁদুরের DSS-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসের তীব্রতা কমাতে কার্যকর।
TNF-α, IL-1β এবং IL-6 হল কোলনিক প্রদাহের গুরুত্বপূর্ণ প্রদাহজনক চিহ্নিতকারী। চিত্র 2A তে দেখানো হয়েছে, নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় DSS কোলনে TNF-α, IL-1β এবং IL-6 এর জিন প্রকাশে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটায়। BLG এর প্রশাসন এই DSS-মধ্যস্থতাকারী পরিবর্তনগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত করতে পারে। এরপর, আমরা কোলন টিস্যুতে প্রদাহজনক সাইটোকাইন TNF-α, IL-1β এবং IL-6 এর মাত্রা নির্ধারণ করতে ELISA ব্যবহার করেছি। ফলাফলগুলি আরও দেখায় যে DSS দিয়ে চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে TNF-α, IL-1β এবং IL-6 এর কোলনিক মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যেখানে BLG চিকিৎসা এই বৃদ্ধিগুলিকে হ্রাস করেছে (চিত্র 2B)।
চিত্র ২: BLG DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের কোলনে প্রোইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন TNF-α, IL-1β এবং IL-6 এর জিন প্রকাশ এবং উৎপাদনকে বাধা দেয়। (A) TNF-α, IL-1β এবং IL-6 এর কোলনিক জিন প্রকাশ; (B) TNF-α, IL-1β এবং IL-6 এর কোলনিক প্রোটিন স্তর। ডেটা গড় ± SEM (n = 4–6) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। #p < 0.05 বা ##p < 0.01 বা ###p < 0.001 বনাম নিয়ন্ত্রণ (কন) গ্রুপ; *p < 0.05 বা **p < 0.01 বনাম DSS গ্রুপ।
UC.24 এর প্যাথোজেনেসিসে অন্ত্রের ডিসবায়োসিস অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। BLG DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে সংশোধন করে কিনা তা তদন্ত করার জন্য, অন্ত্রের উপাদানের ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায় বিশ্লেষণ করার জন্য 16S rRNA সিকোয়েন্সিং করা হয়েছিল। ভেন চিত্রটি দেখায় যে তিনটি গ্রুপ 385 OTU ভাগ করে। একই সময়ে, প্রতিটি গ্রুপের অনন্য OTU ছিল (চিত্র 3A)। তদুপরি, চিত্র 3B এবং C-তে দেখানো Chao1 সূচক এবং শ্যানন সূচক দেখায় যে BLG-চিকিৎসা করা ইঁদুরগুলিতে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার সম্প্রদায় বৈচিত্র্য হ্রাস পেয়েছে, কারণ BLG-চিকিৎসা করা গোষ্ঠীতে শ্যানন সূচক উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। তিনটি গ্রুপের মধ্যে ক্লাস্টারিং প্যাটার্ন নির্ধারণের জন্য প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ (PCA) এবং প্রধান স্থানাঙ্ক বিশ্লেষণ (PCoA) ব্যবহার করা হয়েছিল এবং দেখানো হয়েছিল যে BLG চিকিত্সার পরে DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের সম্প্রদায় কাঠামো স্পষ্টভাবে পৃথক করা হয়েছিল (চিত্র 3D এবং E)। এই তথ্যগুলি থেকে বোঝা যায় যে BLG চিকিত্সা DSS-প্ররোচিত কোলাইটিসযুক্ত ইঁদুরের সম্প্রদায় কাঠামোকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করেছে।
চিত্র ৩: DSS-প্ররোচিত কোলাইটিসে আক্রান্ত ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার বৈচিত্র্যকে BLG পরিবর্তন করে। (A) OTU-এর ভেন ডায়াগ্রাম, (B) Chao1 সূচক, (C) শ্যাননের সমৃদ্ধি সূচক, (D) OTU-এর প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ (PCA) স্কোর প্লট, (E) OTU প্রধান স্থানাঙ্ক বিশ্লেষণ (PCoA) স্কোর চিত্র। তথ্য গড় ± SEM (n = 6) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে।**p < 0.01 বনাম DSS গ্রুপ।
মল মাইক্রোবায়োটার নির্দিষ্ট পরিবর্তনগুলি মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা সমস্ত ট্যাক্সোনমিক স্তরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার গঠন বিশ্লেষণ করেছি। চিত্র 4A-তে দেখানো হয়েছে, সমস্ত গোষ্ঠীর প্রধান ফাইলা ছিল ফার্মিকিউটস এবং ব্যাকটেরয়েডেটস, তারপরে ভেরুকোমাইক্রোবিয়া। নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের তুলনায় ডিএসএস-চিকিত্সা করা ইঁদুরের মল মাইক্রোবায়াল সম্প্রদায়গুলিতে ফার্মিকিউটস এবং ফার্মিকিউটস/ব্যাকটেরয়েডেটস অনুপাতের আপেক্ষিক প্রাচুর্য উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং বিএলজি চিকিত্সার পরে এই পরিবর্তনগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত হয়েছে। বিশেষ করে, বিএলজি চিকিত্সা ডিএসএস-প্ররোচিত কোলাইটিসযুক্ত ইঁদুরের মলে ভেরুকোব্যাকটেরিয়ামের আপেক্ষিক প্রাচুর্য উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করেছে। পারিবারিক স্তরে, মল মাইক্রোবায়াল সম্প্রদায়গুলি ল্যাচনোস্পিরিয়াসি, মুরিবাকুলাসি, আক্কারম্যানসিয়াসি, রুমিনোকোকাসি এবং প্রিভোটেলাসি (চিত্র 4B) দ্বারা দখল করা হয়েছিল। ডিএসএস গ্রুপের সাথে তুলনা করে, বিএলজি হ্রাসের ফলে অ্যাক্কারম্যানসিয়াসির প্রাচুর্য বৃদ্ধি পেয়েছে, কিন্তু ল্যাচনোস্পিরিয়াসির প্রাচুর্য হ্রাস পেয়েছে এবং Ruminococcaceae। উল্লেখযোগ্যভাবে, বংশ স্তরে, মল মাইক্রোবায়োটা Lachnospira_NK4A136_group, Akkermansia এবং Prevotellaceae_UCG-001 (চিত্র 4C) দ্বারা দখল করা হয়েছিল। এই অনুসন্ধানে আরও প্রমাণিত হয়েছে যে BLG চিকিৎসা DSS চ্যালেঞ্জের প্রতিক্রিয়ায় মাইক্রোবায়োটার ভারসাম্যহীনতাকে কার্যকরভাবে বিপরীত করেছে, যা Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas এবং Oscillibacter-এর হ্রাস এবং Akkermansia এবং Prevotellaceae_UCG-001-এর বৃদ্ধি দ্বারা চিহ্নিত।
চিত্র ৪: DSS-প্ররোচিত কোলাইটিস ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার প্রাচুর্যকে BLG পরিবর্তন করে। (A) ফাইলাম স্তরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার প্রাচুর্য; (B) পারিবারিক স্তরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার প্রাচুর্য; (C) বংশ স্তরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার প্রাচুর্য। তথ্য গড় ± SEM (n = 6) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। #p < 0.05 বা ###p < 0.001 বনাম নিয়ন্ত্রণ (কন) গ্রুপ; *p < 0.05 বা **p < 0.01 বা ***p < 0.001 বনাম DSS গ্রুপ।
শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিড (SCFAs) হল Akkermansia এবং Prevotellaceae_UCG-001 এর প্রধান বিপাক, যেখানে অ্যাসিটেট, প্রোপিওনেট এবং বুটাইরেট হল অন্ত্রের লুমেনে সর্বাধিক প্রচুর পরিমাণে SCFA, 25-27 বিবেচনা করে আমরা এখনও আমাদের গবেষণায় রয়েছি। চিত্র 5-তে দেখানো হয়েছে, DSS-চিকিৎসা করা গোষ্ঠীতে মল অ্যাসিটেট, প্রোপিওনেট এবং বুটাইরেটের ঘনত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যেখানে BLG চিকিৎসা এই হ্রাসকে মূলত দমন করতে পারে।
চিত্র ৫। DSS-প্ররোচিত কোলাইটিসে আক্রান্ত ইঁদুরের মলে BLG SCFA-এর মাত্রা বৃদ্ধি করে। (A) মলে অ্যাসিটিক অ্যাসিডের পরিমাণ; (B) মলে প্রোপায়োনিক অ্যাসিডের পরিমাণ; (C) মলে বিউটেরিক অ্যাসিডের পরিমাণ। তথ্য গড় ± SEM (n = 6) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। #p < 0.05 বা ##p < 0.01 বনাম নিয়ন্ত্রণ (কন) গ্রুপ; *p < 0.05 বা **p < 0.01 বনাম DSS গ্রুপ।
আমরা আরও গণনা করেছি পিয়ারসনের জিনাস-স্তরের ডিফারেনশিয়াল SCFA এবং ফেকাল মাইক্রোবায়োটার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ। চিত্র 6-এ দেখানো হয়েছে, অ্যাকারম্যানসিয়া প্রোপায়োনিক অ্যাসিড (পিয়ারসন = 0.4866) এবং বিউটিরিক অ্যাসিড (পিয়ারসন = 0.6192) উৎপাদনের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল। বিপরীতে, এন্টারোমোনাস এবং অসিলোব্যাক্টর উভয়ই অ্যাসিটেট উৎপাদনের সাথে নেতিবাচকভাবে যুক্ত ছিল, পিয়ারসন সহগ যথাক্রমে 0.4709 এবং 0.5104। একইভাবে, রুমিনোকোকাসেই_ইউসিজি-014 যথাক্রমে প্রোপায়োনিক অ্যাসিড (পিয়ারসন = 0.4508) এবং বিউটিরিক অ্যাসিড (পিয়ারসন = 0.5842) উৎপাদনের সাথে নেতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল।
চিত্র 6 পিয়ারসনের ডিফারেনশিয়াল SCFA এবং কোলনিক জীবাণুর মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ। (A) অ্যাসিটিক অ্যাসিড সহ এন্টারোমোনাস; (B) অ্যাসিটিক অ্যাসিড সহ কনকাশন ব্যাসিলাস; (C) অ্যাকারম্যানসিয়া বনাম প্রোপায়োনিক অ্যাসিড; (D) প্রোপায়োনিক অ্যাসিড সহ রুমিনোকোকাস_UCG-014; (E) বিউটিরিক অ্যাসিড সহ অ্যাকারম্যানসিয়া; (F) ) বিউটিরিক অ্যাসিড সহ রুমিনোকোকাস _UCG-014।
গ্লুকাগন-সদৃশ পেপটাইড-১ (GLP-1) হল প্রোগ্লুকাগন (Gcg) এর একটি কোষ-ধরণের-নির্দিষ্ট পোস্ট-ট্রান্সলেশনাল পণ্য যার প্রদাহ-বিরোধী বৈশিষ্ট্য রয়েছে।28 চিত্র 7-এ দেখানো হয়েছে, DSS Gcg mRNA এক্সপ্রেশনে উল্লেখযোগ্য হ্রাস ঘটায়। কোলন এবং BLG চিকিত্সা নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় DSS-প্ররোচিত Gcg হ্রাসকে উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত করতে পারে (চিত্র 7A)। একই সময়ে, DSS-চিকিত্সা করা গ্রুপে সিরামে GLP-1 এর মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছিল এবং BLG চিকিত্সা এই হ্রাসকে মূলত প্রতিরোধ করতে পারে (চিত্র 7B)। যেহেতু শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিডগুলি G-প্রোটিন-কাপল্ড রিসেপ্টর 43 (GRP43) এবং G-প্রোটিন-কাপল্ড রিসেপ্টর 41 (GRP41) সক্রিয়করণের মাধ্যমে GLP-1 নিঃসরণকে উদ্দীপিত করতে পারে, তাই আমরা কোলাইটিস ইঁদুরের কোলনে GPR41 এবং GRP43 পরীক্ষা করে দেখেছি যে DSS চ্যালেঞ্জের পরে GRP43 এবং GPR41 এর কোলনিক mRNA এক্সপ্রেশন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, এবং BLG চিকিত্সা কার্যকরভাবে এইগুলি উদ্ধার করতে পারে। হ্রাস পায় (চিত্র 7C এবং D)।
চিত্র ৭: BLG DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের সিরাম GLP-1 মাত্রা এবং কোলোনিক Gcg, GPR41 এবং GRP43 mRNA এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি করে। (A) কোলন টিস্যুতে Gcg mRNA এক্সপ্রেশন; (B) সিরামে GLP-1 স্তর; (C) কোলন টিস্যুতে GPR41 mRNA এক্সপ্রেশন; (D) কোলন টিস্যুতে GPR43 mRNA এক্সপ্রেশন। ডেটা গড় ± SEM (n = 5–6) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। #p < 0.05 বা ##p < 0.01 বনাম নিয়ন্ত্রণ (কন) গ্রুপ; *p < 0.05 বনাম DSS গ্রুপ।
যেহেতু BLG চিকিৎসা DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের সিরাম GLP-1 মাত্রা, কোলনিক Gcg mRNA এক্সপ্রেশন এবং মল SCFA মাত্রা বৃদ্ধি করতে পারে, তাই আমরা প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ থেকে GLP-1 মুক্তির উপর নিয়ন্ত্রণ (F-Con), DSS কোলাইটিস (F-Con)-DSS) এবং BLG-চিকিৎসা করা কোলাইটিস (F-BLG) ইঁদুরের অ্যাসিটেট, প্রোপিওনেট এবং বুটাইরেট পরীক্ষা করে দেখেছি। চিত্র 8A-তে দেখানো হয়েছে, 2 mM অ্যাসিটিক অ্যাসিড, প্রোপিওনিক অ্যাসিড এবং বুটাইরিক অ্যাসিড দিয়ে চিকিত্সা করা প্রাথমিক মাউস কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষগুলি যথাক্রমে GLP-1 মুক্তিকে উল্লেখযোগ্যভাবে উদ্দীপিত করেছে, পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। 29,30 একইভাবে, সমস্ত F-Con, F-DSS এবং F-BLG (0.25 গ্রাম মলের সমতুল্য) প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ থেকে GLP-1 মুক্তিকে ব্যাপকভাবে উদ্দীপিত করেছে। উল্লেখযোগ্যভাবে, F-DSS-চিকিৎসা করা প্রাথমিক মাউস কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ দ্বারা মুক্তিপ্রাপ্ত GLP-1 এর পরিমাণ 2000 এর তুলনায় অনেক কম ছিল। F-Con এবং F-BLG-চিকিৎসা করা প্রাথমিক মাউস কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ। (চিত্র 8B)। এই তথ্যগুলি ইঙ্গিত দেয় যে BLG চিকিত্সা অন্ত্রের SCFA-প্রাপ্ত GLP-1 উৎপাদন উল্লেখযোগ্যভাবে পুনরুদ্ধার করেছে।
চিত্র ৮: BLG-প্রাপ্ত SCFA প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ থেকে GLP-1 নিঃসরণকে উদ্দীপিত করে। (A) অ্যাসিটিক অ্যাসিড, প্রোপিওনিক অ্যাসিড এবং বিউটিরিক অ্যাসিড প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ থেকে GLP-1 নিঃসরণকে উদ্দীপিত করে; (B) মল নির্যাস F-Con, F-DSS এবং F-BLG উদ্দীপিত প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ GLP-1 নিঃসৃত পরিমাণ। কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষের অ্যালিকোটগুলি কাচের নীচের পেট্রি ডিশে স্থাপন করা হয়েছিল এবং যথাক্রমে 2 mM অ্যাসিটিক অ্যাসিড, প্রোপিওনিক অ্যাসিড, বিউটিরিক অ্যাসিড এবং মল নির্যাস F-Con, F-DSS এবং F-BLG (0.25 গ্রাম মলের সমতুল্য) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। ৩৭°C তাপমাত্রায় যথাক্রমে ২ ঘন্টা, ৫% CO2। প্রাথমিক মুরিন কোলনিক এপিথেলিয়াল কোষ থেকে নির্গত GLP-1 এর পরিমাণ ELISA দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। তথ্যগুলি গড় ± SEM (n = 3) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে।#p < 0.05 বা ##p < 0.01 বনাম ফাঁকা বা F-Con; *p < 0.05 বনাম F-DSS।
সংক্ষেপণ: Ace, অ্যাসিটিক অ্যাসিড; Pro, প্রোপিওনিক অ্যাসিড; তবে, বিউটেরিক অ্যাসিড; F-Con, নিয়ন্ত্রণ ইঁদুর থেকে প্রাপ্ত মল নির্যাস; F-DSS, কোলাইটিস ইঁদুর থেকে প্রাপ্ত মল নির্যাস; F-BLG, BLG-চিকিৎসা করা কোলন প্রদাহজনক ইঁদুরের মল নির্যাস থেকে প্রাপ্ত।
বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা কর্তৃক একটি অবাধ্য রোগ হিসেবে তালিকাভুক্ত, UC একটি বিশ্বব্যাপী বিপদ হয়ে উঠছে; তবে, রোগের পূর্বাভাস, প্রতিরোধ এবং চিকিৎসার কার্যকর পদ্ধতি এখনও সীমিত। অতএব, UC-এর জন্য নতুন নিরাপদ এবং কার্যকর থেরাপিউটিক কৌশল অন্বেষণ এবং বিকাশের জরুরি প্রয়োজন। ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের প্রস্তুতি একটি আশাব্যঞ্জক বিকল্প কারণ বহু শতাব্দী ধরে চীনা জনসংখ্যার মধ্যে UC-এর চিকিৎসায় অনেক ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের প্রস্তুতি কার্যকর বলে প্রমাণিত হয়েছে এবং সেগুলি সবই জৈব জৈব এবং প্রাকৃতিক উপকরণ যা বেশিরভাগই মানুষ এবং প্রাণীর জন্য ক্ষতিকারক নয়। 31,32 এই গবেষণার লক্ষ্য UC-এর চিকিৎসার জন্য একটি নিরাপদ এবং কার্যকর ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের প্রস্তুতি খোঁজা এবং এর কর্মপদ্ধতি অন্বেষণ করা। BLG হল ফ্লুর চিকিৎসায় ব্যবহৃত একটি সুপরিচিত চীনা ভেষজ সূত্র। 8,33 আমাদের পরীক্ষাগার এবং অন্যান্য গবেষণাগারে কাজ করে দেখা গেছে যে নীল, BLG-এর মতো একই কাঁচামাল থেকে তৈরি একটি প্রক্রিয়াজাত ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ পণ্য, মানুষ এবং প্রাণীদের UC-এর চিকিৎসায় উল্লেখযোগ্য কার্যকারিতা প্রদর্শন করে। 4,34 তবে, BLG-এর অ্যান্টি-কোলাইটিস প্রভাব এবং এর প্রভাব প্রক্রিয়াটি অস্পষ্ট। বর্তমান গবেষণায়, আমাদের ফলাফলগুলি দেখায় যে BLG কার্যকরভাবে DSS-প্ররোচিত কোলনিক প্রদাহকে কমিয়ে দেয়, যা মড্যুলেশনের সাথে সম্পর্কিত। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার বিশ্লেষণ এবং অন্ত্র থেকে প্রাপ্ত GLP-1 উৎপাদন পুনরুদ্ধার।
এটা সুপরিচিত যে UC-তে ওজন হ্রাস, ডায়রিয়া, মলদ্বার রক্তপাত এবং ব্যাপক কোলনিক মিউকোসাল ক্ষতির মতো সাধারণ ক্লিনিকাল বৈশিষ্ট্য সহ রিল্যাপসিং পিরিয়ড দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। 35 সুতরাং, দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিস পাঁচ দিনের জন্য 1.8% DSS এর তিনটি চক্র পরিচালনা করে পরিচালিত হয়েছিল, তারপরে সাত দিন জল পান করা হয়েছিল। চিত্র 1B-তে দেখানো হয়েছে, ওঠানামা ওজন হ্রাস এবং DAI স্কোর দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসের সফল প্রবর্তনের ইঙ্গিত দেয়। BLG দিয়ে চিকিত্সা করা গ্রুপের ইঁদুরগুলি 8 তম দিন থেকে আপশিফ্ট পুনরুদ্ধার দেখিয়েছিল, যা 24 তম দিনের থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা ছিল। DAI স্কোরেও একই পরিবর্তন লক্ষ্য করা গেছে, যা কোলাইটিসের ক্লিনিকাল উন্নতির উন্নতির ইঙ্গিত দেয়। কোলনের আঘাত এবং প্রদাহজনক অবস্থার ক্ষেত্রে, কোলনের দৈর্ঘ্য, কোলন টিস্যুর ক্ষতি, এবং জিনের প্রকাশ এবং কোলন টিস্যুতে প্রোইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন TNF-α, IL-1β, এবং IL-6 এর উৎপাদনও BLG চিকিৎসার পরে ব্যাপকভাবে উন্নত হয়েছিল। সামগ্রিকভাবে, এই ফলাফলগুলি স্পষ্টভাবে দেখায় যে BLG ইঁদুরের দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসের চিকিৎসায় কার্যকর।
BLG কীভাবে তার ফার্মাকোলজিকাল প্রভাব প্রয়োগ করে? পূর্ববর্তী অসংখ্য গবেষণায় দেখা গেছে যে UC-এর প্যাথোজেনেসিসে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে এবং মাইক্রোবায়োম-ভিত্তিক এবং মাইক্রোবায়োম-লক্ষ্যযুক্ত থেরাপি UC-এর চিকিৎসার জন্য একটি অত্যন্ত আকর্ষণীয় কৌশল হিসেবে আবির্ভূত হয়েছে। বর্তমান গবেষণায়, আমরা দেখিয়েছি যে BLG চিকিৎসার ফলে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা গঠনে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন এসেছে, যা পরামর্শ দেয় যে DSS-প্ররোচিত কোলাইটিসের বিরুদ্ধে BLG-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার মড্যুলেশনের সাথে সম্পর্কিত। এই পর্যবেক্ষণটি এই ধারণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার হোমিওস্ট্যাসিস পুনঃপ্রোগ্রাম করা TCM প্রস্তুতির কার্যকারিতা বোঝার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ পদ্ধতি।36,37 উল্লেখযোগ্যভাবে, আক্কারম্যানসিয়া হল একটি গ্রাম-নেগেটিভ এবং কঠোরভাবে অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়া যা অন্ত্রের শ্লেষ্মা স্তরে বাস করে, যা মিউসিনকে হ্রাস করে, প্রোপিওনিক অ্যাসিড তৈরি করে, গবলেট কোষের পার্থক্যকে উদ্দীপিত করে এবং মিউকোসা বজায় রাখে। বাধা অখণ্ডতার কার্যকারিতা।26 একাধিক ক্লিনিকাল এবং প্রাণীর তথ্য থেকে জানা যায় যে আক্কারম্যানসিয়া সুস্থ মিউকোসার সাথে অত্যন্ত সম্পর্কিত,38 এবং আক্কারম্যানসিয়া spp-এর মৌখিক প্রশাসন। মিউকোসাল প্রদাহ উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করতে পারে।39 আমাদের বর্তমান তথ্য থেকে জানা যায় যে BLG চিকিৎসার পর Akkermansia-এর আপেক্ষিক প্রাচুর্য উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। এছাড়াও, Prevotellaceae_UCG-001 হল একটি SCFA-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া।27 একাধিক গবেষণায় দেখা গেছে যে কোলাইটিস আক্রান্ত প্রাণীদের মলে Prevotellaceae_UCG-001 কম আপেক্ষিক প্রাচুর্যে পাওয়া গেছে।40,41 আমাদের বর্তমান তথ্য থেকেও দেখা যায় যে BLG চিকিৎসা DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের কোলনে Prevotellaceae_UCG-001-এর আপেক্ষিক প্রাচুর্য উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করতে পারে।বিপরীতে, Oscillibacter হল একটি মেসোফিলিক, কঠোরভাবে অ্যানেরোবিক ব্যাকটেরিয়া।42 রিপোর্ট করেছে যে UC ইঁদুরে Oscillibacter-এর আপেক্ষিক প্রাচুর্য উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং IL-6 এবং IL-1β স্তর এবং প্যাথলজিকাল স্কোরের সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল।43,44 উল্লেখযোগ্যভাবে, BLG চিকিৎসা DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের মলে Oscillibacter-এর আপেক্ষিক প্রাচুর্য উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে।উল্লেখযোগ্যভাবে, এই BLG-পরিবর্তিত ব্যাকটেরিয়াগুলি ছিল সবচেয়ে বেশি SCFA-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া।পূর্ববর্তী অসংখ্য গবেষণায় সম্ভাব্যতা প্রদর্শন করা হয়েছে কোলনিক প্রদাহ এবং অন্ত্রের এপিথেলিয়াল অখণ্ডতার সুরক্ষায় SCFA-এর উপকারী প্রভাব। 45,46 আমাদের বর্তমান তথ্যে আরও দেখা গেছে যে BLG-চিকিৎসা করা ইঁদুরের মধ্যে DSS-চিকিৎসা করা মলে SCFA অ্যাসিটেট, প্রোপিওনেট এবং বুটাইরেটের ঘনত্ব ব্যাপকভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। একসাথে নেওয়া হলে, এই ফলাফলগুলি স্পষ্টভাবে প্রমাণ করে যে BLG চিকিত্সা দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসে আক্রান্ত ইঁদুরের মধ্যে DSS-প্ররোচিত SCFA-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া কার্যকরভাবে বৃদ্ধি করতে পারে।
GLP-1 হল একটি ইনক্রিটিন যা মূলত ইলিয়াম এবং কোলনে উৎপাদিত হয় এবং পেট খালি করতে বিলম্বিত করতে এবং খাবার পর রক্তে গ্লুকোজ কমাতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।47 প্রমাণ থেকে জানা যায় যে ডাইপেপটিডিল পেপটিডেস (DPP)-4, একটি GLP-1 রিসেপ্টর অ্যাগোনিস্ট এবং একটি GLP-1 ন্যানোমেডিসিন ইঁদুরের অন্ত্রের প্রদাহ কার্যকরভাবে উপশম করতে পারে।48-51 পূর্ববর্তী গবেষণায় যেমন রিপোর্ট করা হয়েছে, উচ্চ SCFA ঘনত্ব মানুষ এবং ইঁদুরের প্লাজমা GLP-1 স্তরের সাথে যুক্ত ছিল। 52 আমাদের বর্তমান তথ্য দেখায় যে BLG চিকিত্সার পরে, সিরাম GLP-1 স্তর এবং Gcg mRNA এক্সপ্রেশন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। একইভাবে, DSS-চিকিত্সা করা কোলাইটিস ইঁদুরের মল নির্যাস দিয়ে উদ্দীপনার তুলনায় BLG-চিকিত্সা করা কোলাইটিস ইঁদুরের মল নির্যাস দিয়ে উদ্দীপনার পরে কোলনিক কালচারে GLP-1 নিঃসরণ উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। SCFA কীভাবে GLP-1 এর মুক্তিকে প্রভাবিত করে?Gwen Tolhurst et al. রিপোর্ট করা হয়েছে যে SCFA GRP43 এবং GPR41 এর মাধ্যমে GLP-1 নিঃসরণকে উদ্দীপিত করতে পারে।29 আমাদের বর্তমান তথ্য আরও দেখায় যে BLG চিকিৎসা DSS-চিকিৎসা করা ইঁদুরের কোলনে GRP43 এবং GPR41 এর mRNA এক্সপ্রেশন উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করে। এই তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে BLG চিকিৎসা GRP43 এবং GPR41 সক্রিয় করে SCFA-প্রচারিত GLP-1 উৎপাদন পুনরুদ্ধার করতে পারে।
চীনে BLG একটি দীর্ঘমেয়াদী ওভার-দ্য-কাউন্টার (OTC) ওষুধ। কুনমিং ইঁদুরের ক্ষেত্রে BLG-এর সর্বোচ্চ সহনীয় ডোজ হল 80 গ্রাম/কেজি, এবং কোনও তীব্র বিষাক্ততা পরিলক্ষিত হয়নি।53 বর্তমানে, মানুষের ক্ষেত্রে BLG-এর প্রস্তাবিত ডোজ (চিনি ছাড়া) হল 9-15 গ্রাম/দিন (দিনে 3 বার)। আমাদের গবেষণায় দেখা গেছে যে 1 গ্রাম/কেজি BLG ইঁদুরের DSS-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী রিল্যাপসিং কোলাইটিসকে উপশম করে। এই ডোজটি ক্লিনিক্যালি ব্যবহৃত BLG ডোজের কাছাকাছি। আমাদের গবেষণায় আরও দেখা গেছে যে এর কর্মের প্রক্রিয়াটি অন্তত আংশিকভাবে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার পরিবর্তনের মাধ্যমে মধ্যস্থতা করে, বিশেষ করে SCFA-উৎপাদনকারী ব্যাকটেরিয়া, যেমন Akkermansia এবং Prevotellaceae_UCG-001, অন্ত্র থেকে প্রাপ্ত GLP-1 উৎপাদন পুনরুদ্ধার করে। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে BLG ক্লিনিকাল কোলাইটিস চিকিৎসার জন্য একটি সম্ভাব্য থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে আরও বিবেচনার যোগ্য। তবে, মাইক্রোবায়োটা-ঘাটতিযুক্ত ইঁদুর এবং মল ব্যাকটেরিয়া প্রতিস্থাপন দ্বারা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে সংশোধন করার সঠিক প্রক্রিয়াটি এখনও নিশ্চিত করা হয়নি।
Ace, অ্যাসিটিক অ্যাসিড; but, butyric অ্যাসিড; BLG, pandan; DSS, dextran sodium sulfate; DAI, রোগ কার্যকলাপ সূচক; DPP, dipeptidyl peptidase; FID, শিখা আয়নীকরণ সনাক্তকারী; F-Con, ইঁদুরের মল নির্যাস নিয়ন্ত্রণ; F-DSS, DSS কোলাইটিস ইঁদুরের মল নির্যাস; F-BLG, BLG-চিকিৎসা করা কোলাইটিস ইঁদুরের মল নির্যাস; GLP-1, গ্লুকাগন-জাতীয় পেপটাইড-1; Gcg, গ্লুকাগন; গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি, গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি; GRP43, G প্রোটিন-কাপল্ড রিসেপ্টর 43; GRP41, G প্রোটিন-কাপল্ড রিসেপ্টর 41; H&E, হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন; HBSS, হ্যাঙ্কসের ব্যালেন্সড সল্ট সলিউশন; OTC, OTC; PCA, প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ; PCoA, প্রধান স্থানাঙ্ক বিশ্লেষণ; Pro, propionic অ্যাসিড; SASP, সালফাসালাজিন; SCFA, শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিড; চীনা ঔষধ, ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধ; ইউসি, আলসারেটিভ কোলাইটিস।
সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রোটোকলগুলি পেকিং বিশ্ববিদ্যালয় শেনজেন-হংকং বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি বিশ্ববিদ্যালয় মেডিকেল সেন্টার (শেনজেন, চীন) এর প্রাণী নীতি কমিটি দ্বারা প্রাতিষ্ঠানিক নির্দেশিকা এবং প্রাণী নিয়ন্ত্রণ (নীতিশাস্ত্র নম্বর A2020157) অনুসারে অনুমোদিত হয়েছিল।
সকল লেখক ধারণা এবং নকশা, তথ্য অর্জন, অথবা তথ্য বিশ্লেষণ এবং ব্যাখ্যায় গুরুত্বপূর্ণ অবদান রেখেছেন; নিবন্ধটির খসড়া তৈরিতে বা গুরুত্বপূর্ণ বৌদ্ধিক বিষয়বস্তুর সমালোচনামূলক সংশোধনে অংশগ্রহণ করেছেন; বর্তমান জার্নালে পাণ্ডুলিপি জমা দিতে সম্মত হয়েছেন; অবশেষে প্রকাশনার জন্য সংস্করণটি অনুমোদন করেছেন; কাজের সকল দিকের জন্য দায়ী।
এই কাজটি চীনের জাতীয় প্রাকৃতিক বিজ্ঞান ফাউন্ডেশন (81560676 এবং 81660479), শেনজেন বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রথম-শ্রেণীর প্রকল্প (86000000210), শেনজেন বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি উদ্ভাবন কমিটি তহবিল (JCYJ20210324093810026), এবং গুয়াংডং প্রাদেশিক চিকিৎসা বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি গবেষণা তহবিল (A2020157 এবং A2020272), গুইঝো মেডিকেল বিশ্ববিদ্যালয় ফার্মেসি গুইঝো প্রদেশ দ্বারা অর্থায়িত, কী ল্যাবরেটরি (YWZJ2020-01) এবং পিকিং বিশ্ববিদ্যালয় শেনজেন হাসপাতাল (JCYJ2018009) দ্বারা সমর্থিত ছিল।
১. ট্যাং বি, ঝু জে, ঝাং বি, প্রমুখ। ইঁদুরের ডেক্সট্রান সোডিয়াম সালফেট-প্ররোচিত পরীক্ষামূলক কোলাইটিসে প্রদাহ-বিরোধী এজেন্ট হিসেবে ট্রিপটোলাইডের থেরাপিউটিক সম্ভাবনা। প্রি-ইমিউন।২০২০;১১:৫৯২০৮৪.ডোই: ১০.৩৩৮৯/ফিম্মু।২০২০.৫৯২০৮৪
২. কাপলান জিজি। আইবিডির বিশ্বব্যাপী বোঝা: ২০১৫ থেকে ২০২৫ পর্যন্ত। ন্যাট রেভ গ্যাস্ট্রোএন্টেরল হেপাটল। ২০১৫; ১২:৭২০–৭২৭.ডোই: ১০.১০৩৮/এনআরগাস্ট্রো.২০১৫.১৫০
৩. পেং জে, ঝেং টিটি, লি জু, প্রমুখ। উদ্ভিদ-উদ্ভূত ক্ষারক: প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগের প্রতিশ্রুতিশীল রোগ সংশোধক। প্রিফার্মাকোলজি.২০১৯;১০:৩৫১.ডোই:১০.৩৩৮৯/এফফার.২০১৯.০০৩৫১
৪. জিয়াও হাইতেং, পেং জি, ওয়েন বি, এট আল। ইঁদুরের DSS-প্ররোচিত কোলাইটিসে ইন্ডিগো ন্যাচারালিস কোলনিক অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং Th1/Th17 প্রতিক্রিয়াগুলিকে বাধা দেয়। অক্সিড মেড সেল লংগেভ.২০১৯;২০১৯:৯৪৮০৯৪৫.ডোই: ১০.১১৫৫/২০১৯/৯৪৮০৯৪৫
৫. চেন এম, ডিং ওয়াই, টং জেড। আলসারেটিভ কোলাইটিসের চিকিৎসায় সোফোরা ফ্ল্যাভেসেন্স (সোফোরা ফ্ল্যাভেসেন্স) এর কার্যকারিতা এবং সুরক্ষা: ক্লিনিকাল প্রমাণ এবং সম্ভাব্য প্রক্রিয়া। প্রিফার্মাকোলজি.২০২০;১১:৬০৩৪৭৬.ডোই:১০.৩৩৮৯/এফফার.২০২০.৬০৩৪৭৬
৬. কাও ফ্যাং, লিউ জি, শা বেনক্সিং, প্যান এইচএফ। প্রাকৃতিক পণ্য: প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগের চিকিৎসার জন্য পরীক্ষামূলকভাবে কার্যকর ওষুধ। কুর ফার্মাসিউটিক্যালস।২০১৯;২৫:৪৮৯৩–৪৯১৩.ডোই: ১০.২১৭৪/১৩৮১৬১২৮২৫৬৬৬১৯১২১৬১৫৪২২৪
৭. ঝাং সি, জিয়াং এম, লু এ. ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধের সাহায্যে আলসারেটিভ কোলাইটিসের সহায়ক চিকিৎসার প্রতিফলন। ক্লিনিক্যাল রেভ অ্যালার্জি ইমিউনাইজেশন। ২০১৩;৪৪:২৭৪–২৮৩.ডোই: ১০.১০০৭/s১২০১৬-০১২-৮৩২৮-৯
৮. লি ঝংটেং, লি লি, চেন টিটি, প্রমুখ। মৌসুমী ইনফ্লুয়েঞ্জার চিকিৎসায় ব্যানলানজেন গ্রানুলের কার্যকারিতা এবং সুরক্ষা: একটি এলোমেলোভাবে নিয়ন্ত্রিত ট্রায়ালের জন্য একটি গবেষণা প্রোটোকল। ট্রায়াল.২০১৫;১৬:১২৬.ডোই: ১০.১১৮৬/s১৩০৬৩-০১৫-০৬৪৫-এক্স